摘要：细胞培养中支原体污染已经成为严重的问题。为了扩增６种支原体（精氨酸支原体，口腔支原体，人型支原体，猪鼻支原体，发酵支原体及莱氏支原体）核糖体ＲＮＡ操纵子的１６ｓ和２３ｓＤＮＡ间区，设计了三个通用ＰＣＲ引物（Ｆ１，Ｆ２及Ｒ１）．当以６种支原体ＤＮＡ为模板时，引物Ｆ１和Ｒ１产生３４０到４６８ｂｐ的片段，引物Ｆ２和Ｒ１产生１４５到２１１ｂｐ的片段，当用Ｈｅｌａ细胞或Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ作为模板，用引物Ｆ１和Ｒ１时，在电泳中未观察到特定区带。此法最小能检出８．５ｆｇ精氨酸支原体ＤＮＡ，相当于１３个精氨酸支原体。这说明，当这些支原体污染细胞培养时，能用ＰＣＲ法检测出来。

摘要：目的探讨儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后人巨细胞病毒感染的危险因素以及人巨细胞病毒感染对移植后免疫重建的影响。方法采用回顾性队列研究设计,将2020年1月至2022年3月在北京首都儿科研究所血液科接受allo-HSCT治疗的81例患儿纳入研究,并随访1年。采用实时荧光定量PCR方法检测患儿allo-HSCT后的人巨细胞病毒(HCMV)的阳性检出情况,采用多因素logistic回归模型分析导致HCMV感染的危险因素,并采用广义估计方程模型分析HCMV感染对接受allo-HSCT后患儿T细胞的影响。结果81例患儿年龄M(Q_(1),Q_(3))为5.1岁(10个月,13.8岁),男性50例(61.7%)。截至随访终点,共检出HCMV阳性50例,HCMV检出率为61.7%。多因素logistic回归模型结果显示,与移植后0~1级相比,2~4级aGVHD患儿HCMV感染风险较高[OR(95%CI)值:2.735(1.027~7.286)]。广义估计方程模型分析结果显示,移植后HCMV阳性患儿CD3+T细胞数量高于HCMV阴性组[RR(95%CI)值:1.34(1.008~1.795)];CD4^(+)T/CD8^(+)T细胞比值小于HCMV阴性组[RR(95%CI)值:0.377(0.202~0.704)];CD8^(+)T细胞数高于HCMV阴性组[RR(95%CI)值:1.435(1.025~2.061)];效应记忆型CD8^(+)T细胞数量高于HCMV阴性组[RR(95%CI)值:1.877(1.089~3.236)]。结论急性移植物抗宿主病可能是导致allo-HSCT后患儿感染HCMV的危险因素;移植后HCMV感染促进了记忆型CD8^(+)T细胞数量增殖,影响免疫细胞重建。