摘要：立体定向脑电图(SEEG)是一种癫痫术前的微创评估手段,通过立体定向技术置入颅内电极,记录颅内脑电活动和直接电刺激来确定局灶性癫痫患者致痫区,近年来该技术在国内外逐渐普及。为了规范SEEG适应证、禁忌证、电极置入方案设计思路、操作流程、直接电刺激、结果解读等相关问题,共识编写组邀请了国内这一领域的权威专家进行讨论并形成了中国的专家共识。共识认为,SEEG主要用于经无创评估后仍无法明确致痫区但又高度怀疑局灶起始、或致痫区可能累及功能区的药物难治性癫痫的手术前评估。根据SEEG结果可以更加精确地定位致痫区和规划手术,或直接使用SEEG引导射频热凝毁损(SEEG RF-TC)作为治疗手段进行治疗。

摘要：为快速、有效地用ＰＣＲ检测不同组织，根据大鼠脑中谷氨酸受体家族ＤＮＡ序列，在高同源区设计出对谷氨酸家族有专一性的简并性引物。用此引物通过ＰＣＲ扩增来自大脑的多种谷氨酸受体，而味蕾细胞ＰＣＲ产物克隆后的ＤＮＡ序列，仅与脑内代谢型谷氨酸受体四型（ｍＧｌｕＲ４）相一致；在缺少味蕾的舌上皮组织则无此种ＰＣＲ产物。以含味蕾细胞的ＰＣＲ产物为模板，合成同位素标记的ＲＮＡ探针，用ＲＮＡ酶保护法进一步检测ｍＧｌｕＲ４在不同组织中的表达，发现含味蕾的舌上皮组织中有与阳性对照相似的ＲＮＡ片段，而在不含味蕾的舌上皮组织ＲＮＡ中无此片段。因此，推测ｍＧｌｕＲ４可能是谷氨酸味觉的化学感受器。

摘要：目的　用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3’ 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。　方法　设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨酸密码子序列 ,以人GFRα 1全长cDNA为模板 ,PCR扩增编码可溶性GFRα 1序列并亚克隆于pBK RSV真核表达载体 ,转染COS 7细胞 ,收获培养上清 ,进行SDS PAGE及Western免疫印迹分析 ;使用钴离子金属螯合层析柱进行纯化 ;检测RET酪氨酸磷酸化以鉴定其生物学活性。　结果　Western免疫印迹证实培养上清液中有分子量为 6 0kD的特异阳性条带 ,与糖基化的GFRα 1分子量相符 ;金属螯合层析得到纯度达90 %以上的重组GFRα 1蛋白 ,每mlCOS 7培养上清中含有 0 5 μg。　结论　带 6个组氨酸尾的重组可溶性GFRα 1能够介导GDNF的作用 。

摘要：背景:脑内神经递质的检测是神经科学研究的重要内容,目前缺少在无创状态下检测脑内递质的可靠手段。目的:在脑内递质水平正常和低于正常的情况下,分析11mHz超慢波功率与多巴胺水平是否存在对应关系。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/12在首都医科大学北京神经科学研究所实验室完成。材料:选用体质量200～250g的雌性SD大鼠100只,按随机数字表法分为3组,模型组40只,对照组30只,正常组30只。方法:将模型组和对照组大鼠经腔注射麻醉,置于脑立体定位仪进行开颅手术,分别给予2组动物左侧脑黑质部位注射10g/L6-羟基多巴胺和生理盐水各8μL。正常组不作任何处置。主要观察指标:用脑涨落图仪检测3组大鼠脑内11mHz超慢波谱系的功率,同时用高效液相色谱法检测大鼠脑内多巴胺水平,并将2种方法的检测结果进行相关性分析。结果:与正常组比较,对照组大鼠脑内的多巴胺水平左脑下降26.98%,右脑上升16.92%;11mHz谱系的功率值左脑下降64.69%,右脑下降57.67%。与正常组比较,模型组的多巴胺水平左脑下降83.42%,右脑上升27.48%;11mHz谱系的功率值左脑下降83.39%,右脑下降76.62%。3组大鼠左、右脑多巴胺水平与11mHz谱系的功率值均呈正相关(P<0.05～0.01)。结论:两种方法的检测结果有高度相关性,即11mHz谱系的功率值与多巴胺的生化水平有高度相关性。说明在脑内递质水平正常和低于正常的情况下,11mHz谱系功率与多巴胺水平的对应关系是成立的。脑涨落图仪的检测结果准确可靠,用分析脑电超慢谱系的方法来检测脑内神经递质是可行的。

摘要：目的使用载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)方法抑制MN9D细胞中的α-synuclein基因表达,并检测其对细胞增殖和活力的影响。方法在α-synuclein的开放读码区选择两段19个核苷酸的片断,并选择一段与小鼠基因无同源性的阴性对照序列,分别设计合成单链寡核苷酸,退火融合成双链寡核苷酸。将双链寡核苷酸克隆入pENTR/H1/TO质粒载体,鉴定正确后,转染MN9D细胞,通过筛选获得稳定的细胞克隆。使用RT-PCR、Real-timePCR、免疫细胞化学染色和Westernblot方法检测细胞内的α-synuclein的表达水平,鉴定RNAi的效率。利用生长曲线和MTT法分别检测比较各组细胞的增殖和活力。结果转染pSH2/α-SYN的细胞与正常和转染pSH/CON的MN9D细胞相比,α-synuclein mRNA及蛋白水平均明显减少;而转染pSH1/α-SYN的细胞α-synuclein mRNA及蛋白水平与两组对照细胞没有明显差别。抑制α-synuclein表达不影响细胞增殖,但可以降低细胞活力。结论结果表明,SH2/α-SYN是有效的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,通过载体介导的RNAi方法可以有效抑制MN9D细胞中的α-synuclein表达,这为进一步研究α-synuclein蛋白的生理功能及其在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发病中的作用提供了良好的细胞模型;α-synuclein在维持MN9D细胞活力中起到重要作用,α-synuclein功能缺失会导致细胞直接或间接的损伤。

摘要：虽然正电子发射断层成像 (positronemissiontomography ,PET)实验研究证明 ,杏仁核、眶额皮质与人脑在饥饿状态下对食物视觉刺激反应相关 ,但它对人体有微创、时间分辨率低、成本高的缺陷限制了人们在这方面的进一步研究。功能磁共振成像克服了这些缺陷 ,并且它的数据可以单例处理。但它的实验设计比PET的复杂 ,目前也没有较多任务模式设计经验可以借鉴。因此 ,要进行这方面的预实验。 5名健康志愿受试者随机分 3组 ,选择组块、事件相关和快速事件相关任务模式中的一种 ,禁食 12h后扫描。成像过程中 ,受试者接受随机播放的食物图片、非食物图片和空白模糊图片的视觉刺激。再采用SPM2软件处理功能像数据。对感兴趣的食品图片与中性物品图片的对比、食品图片与空白对照组图片对比的相关功能区域进行了t检验后发现 ,事件相关任务模式所得到的相关功能区 ,比其他两类任务模式的相应区域较多地包含了杏仁核、眶额皮质区 ,与既往PET的实验结果相符程度最大。可见事件相关任务模式是一种相对稳定的功能成像模式。

摘要：采用人的全长酪氨酸羟化酶 c DNA为模板 ,设计特定的引物进行 PCR扩增反应 ,获得编码 N-端缺失 14 1个氨基酸的催化结构域 c DNA片段 ,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体 p GEX-4 T-1中 ,构建表达质粒 p GEXTHc,同时构建其全长片段的表达质粒 p GEXTHa。两者分别转化大肠杆菌 BL2 1,以 IPTG诱导可高效表达 ,产物以可溶形式存在 ,经亲和层析纯化后以蛋白酶裂解 ,再经亲和层析分离得到较纯的酶蛋白 ,采用高效液相色谱法 ( HPLC-ECD)检测酶活性 ,结果证明催化结构域活性高于全酶 ,是全酶活性的 2 .

摘要：立体定向脑电图引导射频热凝毁损(SEEG RF-TC)是一种针对药物难治性癫痫的微创治疗手段,近年来在国内外逐步开展。为了进一步规范该临床治疗的应用,邀请了该领域的国内知名专家进行讨论,就该治疗的适应证、禁忌证、治疗方案、治疗的安全性和有效性等方面形成了中国专家共识。共识认为,SEEG RF-TC适应证应分为两类,其中一类以治疗为目的,另一类主要以定位致痫灶为目的兼顾治疗,其电极设计方案也要依据手术目的而具体设计。其安全性较好,对致痫灶局限的如下丘脑错构瘤、脑室旁灰质异位结节等效果较好,对其他类型的局灶性癫痫如海马硬化、局灶性皮质发育不良(FCD)等亦有一定疗效,或起到预测手术切除疗效的目的。

摘要：目的探讨结构拓扑优化技术在寰枢椎关节间融合器设计的应用效果。方法选择1名健康志愿者,进行寰枕交界部位CT扫描,建立寰枢椎三维几何模型;对寰枢椎内固定系统模型基于边界反演法进行材料参数反演,构建各向同性材料参数下的简化模型,采用变密度法对植骨窗部分进行拓扑优化设计,获得植骨窗体积最大且结构刚度满足要求的结构,并几何重构为新型寰枢椎侧块关节间融合器(Cage A)。模拟融合器植入,比较CageA与传统融合器(Cage B)植入后,椎体、融合器及植骨内部应力响应,对植入融合器和椎体力学响应进行评估。结果与传统融合器(Cage B)相比,Cage A模型最大应力明显降低,且应力较均匀分布在支撑面上;在后伸状态下,植入Cage B的整体模型形变峰值明显降低;Cage B植入的椎体最大应力值、植骨体积占比无明显变化。结论借助结构拓扑优化技术设计的寰枢椎关节间融合器,应力分布均匀,椎体受力小。该方法可以实现具有针对性的个体化融合器设计。

摘要：背景:硅壳荧光磁性纳米载体表面功能化后不仅仍具备荧光性、磁性功能,而且还具有携药和携基因潜能,并有良好的生物相容性,可实现对细胞的标记功能。目的:制备Fe3O4@SiO2(FITC)-3-异氰基丙基三乙氧基硅烷-聚酰胺-胺树状大分子(G2.0)纳米颗粒型多功能纳米载体,并评估纳米载体标记A549细胞的能力,在细胞内的分布及与细胞的生物相容性。设计、时间及地点:观察性实验,于2006-06/2007-06在首都医科大学化学生物学与药学院合成了纳米载体,2007-07/2008-07在首都医科大学神经科学研究所完成了复合纳米载体的生物评估。材料和方法:15μL3-异氰基丙基三乙氧基硅烷和195.12mg聚酰胺-胺树状大分子(G2)在无水甲醇环境中反应24h,得到目的产物3-异氰基丙基三乙氧基硅烷-聚酰胺-胺树状大分子;然后将合成好的Fe3O4@SiO2(FITC)与3-异氰基丙基三乙氧基硅烷-聚酰胺-胺树状大分子在甲醇溶液环境下,避光搅拌48h,用永磁铁分离固体,并经无水乙醇洗后真空干燥,得到最终目标载体。主要观察指标:透射电镜观察纳米载体的大小和细胞内分布,Zeta电位测定其生理情况下电荷情况,激光共聚焦显微镜下观察FITC、DAPI和LysotrackerBlue细胞染色情况以评估载体在细胞内定位,CCK-8评估其对细胞毒性作用,流式细胞计数法评价其标记细胞的效率。结果:透射电镜分析表明,修饰的硅壳纳米载体大小约为80nm,pH=7.4,纳米载体zeta电位为+23.93mV。透射电镜和激光共聚焦显微镜结果表明纳米粒主要存在细胞浆中,且能被溶酶体吞噬。CCK-8结果显示纳米载体的浓度高达1g/L时仍无明显的毒性作用。流式细胞计数结果表明,细胞摄取纳米粒呈浓度和时间依赖性。结论:成功制备了硅壳结构的荧光磁性纳米载体,主要分布在细胞浆中,且细胞相容性好。