摘要：背景青少年恶性实体肿瘤的临床特征及预后与儿童和成人不同。目的总结北京地区多中心诊治的青少年恶性实体肿瘤的临床特征及预后。设计横断面调查。方法回顾性分析2010年1月1日至2019年12月31日北京地区7家医院确诊的且当时年龄≥10岁的恶性实体肿瘤初发患儿的临床特征和预后。主要结局指标3年无事件生存率(EFS)和总生存率(OS)。结果共411例恶性实体肿瘤患儿纳入分析,中位年龄150(120~216)月,男239例(58.2%),女172例。中枢神经系统肿瘤183例(44.5%),尤文肉瘤82例(20.0%),横纹肌肉瘤47例(11.4%),神经母细胞瘤33例(8.0%),非横纹肌肉瘤类软组织肉瘤29例(7.1%),颅外生殖细胞肿瘤18例(4.4%),其他肿瘤19例(4.6%)。411例恶性实体肿瘤患儿中,前3位户籍来自华北地区160例(38.9%),华东地区97例(23.6%),中南地区70例(17.0%)。治疗涉及1家、2家和≥3家医院患儿分别有129例(31.4%)、180例(43.8%)和102例(24.8%)。截至末次随访时间2020年6月30日,411例恶性实体肿瘤患儿中位随访时间26(1~120)个月,生存333例(81.0%),死亡78例,发生肿瘤复发/进展145例(35.3%)。3年总体EFS为60.3%,以中枢神经系统肿瘤最高(73.7%),横纹肌肉瘤最低(37.4%);3年总体OS为79.5%,以中枢神经系统肿瘤最高(87.9%)。78例死亡病例中位生存时间13(1~65)个月,其中中枢神经系统肿瘤22例(28.2%),横纹肌肉瘤18例(23.1%),尤文肉瘤16例(20.5%),神经母细胞瘤8例(10.3%),颅外恶性生殖细胞瘤3例(3.8%),非横纹肌肉瘤类软组织肉瘤5例(6.4%),其他肿瘤6例(7.7%)。结论青少年恶性实体肿瘤以中枢神经系统肿瘤最多见,神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤和颅外恶性生殖细胞瘤预后不佳。

摘要：目的构建靶向B细胞淋巴瘤因子6共抑制因子(BCL6 co-repressor,BCOR)基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统,并在HEK293T细胞系中进行BCOR基因编辑,为研究BCOR的功能打下基础。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计两对靶向BCOR基因的单链引导RNA(smallguideRNA,sgRNA),将PX458载体进行BbsⅠ酶切,将sgRNA插入到PX458载体中,转化到宿主菌DH5α大肠埃希菌中。过夜后每个sgRNA-PX458质粒挑取3个阳性克隆,进行PCR和测序验证。挑选序列正确的BCOR sgRNA-PX458质粒,转染HEK 293T细胞,进行BCOR基因编辑,采用荧光显微镜及流式细胞学观察HEK 293T细胞绿色荧光蛋白表达的情况,确定是否成功及转染效率,提取HEK 293T细胞DNA,PCR扩增BCOR基因的相应片段,进一步Sanger测序验证,鉴定BCOR sgRNA-PX458 CRISPR/Cas9系统对BCOR基因的编辑能力和效率。结果经测序验证,成功构建了靶向BCOR sgRNAPX458质粒的CRISPR/Cas9系统,转染HEK293T细胞后,可见HEK293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,测序鉴定发现BCOR sgRNA-PX458质粒能够产生插入或者缺失,可以成功编辑BCOR基因。结论成功构建了靶向BCOR的sgRNA-PX458质粒,可在HEK 293T上成功编辑BCOR基因,为进一步研究BCOR的功能奠定了基础。

摘要：目的肿瘤细胞分选是现阶段实现肿瘤早期诊断的有效手段,微流控芯片技术在细胞分选上具有显著优势,为了设计出一种基于人机交互的肿瘤细胞分选检测技术,引入微流控技术,探究该技术在肿瘤细胞分选、检测中的具体作用效果。方法将微流控芯片技术引入肿瘤细胞分选检测中,利用磁分选技术,通过免疫磁珠靶向标记目标肿瘤细胞,随后结合尺寸分选原理与磁分选技术,制备微流控芯片;在微流控技术对不同肿瘤细胞的混合悬浮液进行细胞的分选、检测的过程中,检测人员通过计算机调整微流控芯片环境中的磁场力大小以及液体流速大小;根据细胞分选检测结果,分析微流控技术的作用效果以及影响因素。结果基于微流控芯片技术的肿瘤细胞分选检测技术,其分选肿瘤细胞的分选效果将受到入口流速、永磁铁剩余磁通密度、细胞悬浮液流速等因素的影响。人为控制这些影响因素,进行cell-MNPs和HL-7720等两种细胞的分选,当细胞混悬液的流速为50uL/min时,目标细胞cell-MNPs分选率达68.3%。结论制备的微流控芯片能够完成肿瘤细胞的分选、检测实验,对肿瘤细胞的检测、分选效率较好,分选过程不受细胞惯性力的作用,因此可将其作为肿瘤分选检测系统的主要技术模块。