摘要：目的：构建针对小鼠凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因的基因打靶置换型载体，并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法：在用噬斑原位杂交法克隆ｍＦⅨ基因组ＤＮＡ并完成结构分析的基础上，利用常规的分子克隆技术，设计并构建置换型载体，经过限制性内切酶酶切鉴定和ＰＣＲ鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的小鼠胚胎干细胞Ｒ１株进行基因转移，经Ｇ４１８／ＧＡＮＣ（Ｇａｎｃｙｃｌｏｖｉｒ）分组药物选择，进行ｐＭＦⅣＤＥＬ载体的应用研究。结果：构建获得包括正负双向选择基因的表达元件、长短同源臂等在内的基因打靶置换型载体ｐＭＦⅨＤＥＬ，在胚胎干细胞中能有效地发生重组，正负双向选择系统的应用对同源重组事件富集效率提高了２４倍。结论：本研究构建获得了针对ｍＦⅨ基因的置换型载体，在胚胎干细胞基因打靶中得到有效的应用。