摘要：目的:构建慢病毒载体并利用miRNA原理进行LMP1病毒癌基因干扰的可行性及有效性研究。方法:基于人miR-30a结构,利用靶点分析软件设计4个LMP1的候选干扰靶点,报告基因EGFP与miRLMP1靶点形成共顺反子表达,靶点载体质粒与LMP1高表达质粒用脂质体共转染工具细胞293FT,用Western blot方法筛选最有效的干扰靶点并用三质粒系统在293FT细胞中包装慢病毒,进行滴度鉴定。结果:在293FT工具细胞中成功筛选到一个高效干扰LMP1基因的靶点序列,在Western blot水平的蛋白干扰率高达95%;在20ml培养上清中可获得具有活性慢病毒颗粒7.2×108个,经纯化浓缩获得重组慢病毒颗粒,滴度高达6×109TU/ml,经流式细胞仪检测在80MOI时其感染EBV阳性的鼻咽癌细胞株C666-1的感染率高达80%以上。结论:基于人miR-30a结构的miR-LMP1能高效干扰LMP1基因的蛋白表达,利用慢病毒载体来建立稳定基因干扰肿瘤细胞株可能是一个良好的方法。