摘要：采用联合酶切法结合UPLC Q-TOF高分辨质谱解析重组水蛭素蛋白的复杂二硫键交联结构。首先从蛋白水平验证重组水蛭素蛋白是否含有游离半胱氨酸,包括高分辨质谱表征相对分子质量和定量检测游离巯基;然后利用单一酶解法标注每个或每组二硫键在蛋白序列中所处的位置;最后根据单酶所测结果,设计混合酶切的方式确定具体的二硫键配对方式,并利用二硫苏糖醇还原法加以验证,最终确证重组水蛭素蛋白的二硫键位置。结果显示,重组水蛭素蛋白存在10个半胱氨酸,共形成5对二硫键,分别为Ṩ1(Cys1-Cys2)、Ṩ2-Ṩ3(Cys3-Cys5/Cys4-Cys6或Cys3-Cys6/Cys4-Cys5)、Ṩ4(Cys7-Cys9)和Ṩ5(Cys8-Cys10)。

摘要：本试验旨在开发一种新型注射用加兰他敏缓释微球制剂的体外释放试验方法。首先合成了硬脂酸加兰他敏,然后以丙交酯乙交酯共聚物为载体,采用o/w型乳化-溶剂挥发法制备其缓释微球。分别表征了所得微球的形貌、粒径、载药量与包封率,以SD大鼠为动物模型考察该微球的体内药物释放行为,绘制体内累积释放曲线。为得到具有良好体内外相关性的体外释放度试验参数,本试验通过Plackett-Burman设计筛选了流通池法中影响微球体外释放的显著因素,再用星点设计-响应面法考察各因素及其交互作用的影响。结果显示,流通池活塞泵流速、释放介质温度、释放介质中牛血清白蛋白(BSA)浓度是影响流通池法测得的微球体外释药数据的显著因素。基于Design-Expert 8.06软件的拟合结果,确定体外释放试验的参数为:活塞泵流速10.55 ml/min、释放介质温度42.54℃、BSA浓度为1.25%,此时测得的微球体外释放数据与其在大鼠体内的释药行为具有较好的相关性。

摘要：目的 对注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(human recombinant neutrophil inhibitory factor and hirulog hybrid,TNHH)的处方及工艺进行筛选和优化,并考察其稳定性。方法 以单因素试验结果为依据,pH范围、甘露醇用量、聚维酮K30用量为自变量,高分子蛋白含量为响应值,采用CCF响应曲面设计试验,分析各自变量及其交互作用对注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白中高分子蛋白含量的影响,筛选出最优处方。为了方便操作,对最优处方调整后制备中试规模3批样品,分别置于40℃、相对湿度(relative humidity,RH)75%条件下2、4周,2~8℃条件下3、6个月,取样,检测外观、pH、反相高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)纯度和体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SECHPLC)纯度,验证该处方和工艺的稳定性。结果 筛选出的最优处方为:pH 4.982 6,甘露醇用量7.986 4%,聚维酮K30用量1.902 7%,最终调整为pH 5.0,甘露醇用量8.0%,聚维酮K30用量2.0%。采用优化处方和工艺制备的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白制剂质量稳定,符合临床用药要求。结论 优选的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白制剂处方工艺合理,适合工业化生产。

摘要：基于卡博替尼(cabozantinib)和foretinib的化学结构,通过改变中间链,设计合成了一系列含有哌嗪酰胺的6,7-二甲氧基-4-(2-氟苯氧基)喹啉类c-Met抑制剂。这些化合物未见文献报道,其结构通过MS和NMR确证。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法和MTT法测定了目标化合物对c-Met的抑制活性和对人结肠癌细胞(HT-29)、人肺癌细胞(H460)、人非小细胞肺癌细胞(A549)和人胃癌细胞(MKN-45)的细胞毒性。结果表明,4-(4-氯苯基)-N-[4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉)氧基]-3-氟苯基]哌嗪-1-甲酰胺(1b)、4-(3-氯苯基)-N-[4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉)氧基]-3-氟苯基]哌嗪-1-甲酰胺(1h)和4-(2-氯苯基)-N-[4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉)氧基]-3-氟苯基]哌嗪-1-甲酰胺(1j)对HT-29、H460、A549和MKN-45细胞的抑制活性明显优于对照药卡博替尼。其中,化合物1h和1j对c-Met具有较强的抑制活性,其IC50值分别为0.007 2和0.009 8 μmol/L。

摘要：抗真菌多肽(AFP)由巨曲霉AFP基因编码,本文采用基因工程方法构建抗真菌多肽AFP基因,将AFP目的基因克隆至毕赤酵母中,经甲醇诱导表达,经离子交换层析和排阻层析方法进行分离纯化,用毛细管电泳方法测定其分子质量为6882Da。体外抗真菌试验结果显示抗真菌多肽AFP能够有效抑制真菌的生长,具有较广的抗菌谱和较高的抑菌活性,具有非常好的潜在应用前景。

摘要：GMP制药车间的设计是将生产管理与药厂的车间设计管理结合起来,统一要求,从生产理论中明确实际的制药企业产品管理对象标准,明确实际的专业化和实施工艺对象分析过程,确定专业化的车间平面设计形式,提出有效的理论依据方式和标准水平,通过分析相关的图形设计,明确实际固体制剂的车间平面布局情况,依照生产管理理论,确定符合实际的GMP车间设计分析过程标准。

摘要：通过正交试验对泛昔洛韦分散片处方进行优化,为该处方的设计提供依据。以崩解时限作为研究的考察指标,采用正交试验考察交联聚维酮(PVPP)浓度、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-K_(30)浓度以及羧甲淀粉钠(CMS-Na)的用量对不同处方泛昔洛韦分散片崩解时限的影响。并根据结果将自制的泛昔洛韦分散片与市售药物进行体外溶出实验对比,观察与市售药物溶出的不同。通过正交试验优化后得到的最佳处方是:当内加PVPP浓度为5%,PVP-K_(30)浓度为1.0%,CMS-Na的用量为5.0%时泛昔洛韦分散片的崩解时限低于3min,而溶出也比市售泛昔洛韦分散片的溶出效果好。本次研究对泛昔洛韦分散片的处方进行优化,效果较好,达到《中国药典》规定的要求。

摘要：目的:构建甲氨蝶呤(MTX)为模型药物及靶向分子偶联壳聚糖(CS),并包载传统中药川芎中生物碱单体川芎嗪(TMP)的主动靶向纳米给药系统(MTX-CS-TMP-NPs),初步探究其对人宫颈癌细胞Hela的靶向性。方法:通过酰胺反应制备甲氨蝶呤-壳聚糖偶联物(MTX-CS),通过傅立叶红外变换光谱、核磁共振氢谱进行验证;采用超滤离心法与高效液相色谱仪测定纳米粒的包封率;采用离子凝胶法制备MTX-CS-TMP-NPs,并以粒径和包封率为评价指标,星点设计-效应面优化确定最优处方并进行表征;采用荧光倒置显微镜定性观察纳米粒的靶向性。结果:MTX-CS红外光谱图中,1650 cm处峰强度增强,3440 cm处峰强度减弱,且出现苯环特征吸收峰,核磁共振氢谱图中,MTX中氢原子化学位移向低场移动,δ值增大,表明MTX-CS成功合成;SEM及TEM显示纳米粒为均一球形,平均粒径为156.6 nm,PDI为0.144,zeta电位为+19.9 mV;TMP的包封率为70.53%,载药量9.26%;荧光倒置显微镜定性观察Hela细胞对实验组的摄取率大于对照组,表明MTX-CS-TMP-NPs对Hela细胞具有靶向性。结论:成功合成MTX-CS并优化处方制备出包封率较高、粒径均一的MTX-CS-TMP-NPs,纳米粒对Hela细胞具有明显的靶向性,靶向机制可能由Hela细胞表面高表达的叶酸受体介导而实现。

摘要：根据质量源于设计的研发思路明确了孟鲁司特钠片的关键质量属性,依据关键质量属性对工艺过程进行风险评估和影响因素分析,并对制备工艺过程中涉及的制剂设备和制剂工艺进行评估和确认。3批验证批次样品含量均大于95%,总杂小于1%,且其他各检验项目均符合质量要求。分别考察了自制片剂与原研制剂(Singulair~?)在0.5%十二烷基硫酸钠水溶液、pH 1.2和pH 6.8介质中的溶出度,结果表明自制片剂与原研制剂的体外溶出行为相似。36名健康志愿者在空腹和餐后状态下单剂量口服自制片剂或原研制剂后,2种制剂在体内的药动学参数无统计学差异(P>0.05)。空腹和餐后状态下,自制片剂的口服相对生物利用度分别为(104.69±10.32)%和(102.60±9.57)%。

摘要：目的研究长效聚乙二醇化修饰的促胰岛素分泌肽。方法设计筛选得到新型GLP-1类似物DT1,进行不同类型和不同分子量的PEG修饰,得到一种长效聚乙二醇化修饰的促胰岛素分泌肽同源二聚体(PEG-Di-DT1),修饰率可达85%,产物纯化后色谱纯度不低于99.0%。结果体内外生物活性测定显示,PEG-Di-DT1体外刺激RIN-m5F细胞释放cAMP的ED 50为14.76 ng/ml(以多肽计,2.74 ng/ml),45μg/kg剂量皮下注射给药对db/db模型小鼠有明显的降血糖作用,维持降血糖时间可达72 h。结论同源双肽的双马来酰亚胺活化PEG修饰,可获得体内外生物活性保留率高的产品。PEG-Di-DT1具有良好的体内外生物活性,有潜力成为治疗人2型糖尿病的长效药物。