摘要：溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是水产养殖中致病性较强的一种条件致病菌,为更灵敏、高效地对其进行检测,研发出一种基于核酸适配体竞争置换作用的检测方法。首先设计并制备出磁珠-核酸适配体-荧光报告探针的检测复合物(MAP检测复合物),然后利用溶藻弧菌与其核酸适配体有较好的亲和特异性,在对样品进行检测时,样品中的溶藻弧菌就会竞争MAP检测复合物中的核酸适配体,从而置换出与该核酸适配体结合的荧光报告探针,再通过检测置换出的报告探针的荧光强度来表征溶藻弧菌的浓度,从而实现对溶藻弧菌的定量检测。结果表明,该方法对溶藻弧菌的检测限可达到1CFU/mL,与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、大肠杆菌(Escherichia coli)等水产养殖中的常见致病微生物没有交叉反应,并在1~20、20~100和100~1000 CFU/mL范围内都表现出较好的线性关系。另外还对MAP检测复合物的制备条件进行了优化,较为理想的制备条件为:100nmol/L核酸适配体与100nmol/L荧光报告探针按体积比1︰1混合结合30 min,制备出50 nmol/L的核酸适配体-荧光报告探针复合物,然后该复合物再与25μg/mL的磁珠按体积比1︰1混合结合60 min,制备出相应的MAP检测复合物。利用核酸适配体的竞争置换作用检测溶藻弧菌有较好的灵敏度和特异性,展现了较好的应用前景。

摘要：为研制能同时预防鳗鲡3种常见病原菌感染的三联外膜蛋白疫苗,分别选择创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)外膜蛋白的ompU、ompA和omp porinП基因,设计特异性引物后分别扩增基因中表达外膜蛋白膜外区域且抗原决定簇丰富的3个基因片段并通过融合PCR技术进行连接。根据表达载体(pGEX-2T-his)的限制性酶切位点,在连接片段的两端引入BamHⅠ和EcoRⅠ两个酶切位点,将3个外膜蛋白基因片段与质粒连接后成功构建了重组表达载体。重组表达载体成功转化大肠杆菌(*** BL21)后,当菌液浓度(D600nm)为0.8时加入0.25mmol/L IPTG,16℃培养过夜后得到了高效表达。表达产物用镍柱进行洗脱纯化后经梯度尿素复性获得了分子质量约85ku的高纯度蛋白。

摘要：为寻找存在于鳗鲡病原性气单胞菌间的共同外膜蛋白保护性抗原。通过NCBI/GenBank数据库检索,找出气单胞菌多种外膜蛋白的序列信息,经比对后找到一条高度保守的基因序列片段。据相应片段从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和杀鲑气单胞胞菌(***)的全基因组序列中钓出Ⅱ型孔蛋白基因的全长序列及该基因区域之外两端的序列。根据嗜水气单胞菌和杀鲑气单胞胞菌这两端序列的保守区域设计一对特异性引物,用该引物扩增到鳗鱼病原库30株气单胞菌中11株菌的Ⅱ型孔蛋白基因全长,经测序后获得10株菌的Ⅱ型孔蛋白基因全长序列。选择遗传距离居中菌株,对该基因推导的表达产物进行蛋白结构预测、亲水性和抗原决定簇分析后发现,这些蛋白均具有三级结构,亲水性强且具有丰富的抗原决定簇。不同菌株的多个抗原决定簇经比对分析后,寻找到存在于多株鳗鲡病原性气单胞菌间的6个保守抗原决定簇。为养殖鳗鲡病原菌外膜蛋白共同保护性抗原的基因工程疫苗研究奠定了理论基础。

摘要：在自然或人为因素下容易出现鳗苗种质混杂的现象,由于鳗鲡苗种在形态上十分相似,难以区分。为了保障鳗农的合法利益和提高养殖效益,急需建立一种能够在现场快速、高效使用的鳗鲡种质鉴定方法。本研究通过比对找出5种常见鳗鲡养殖种类:日本鳗鲡(Anguilla japonica)、美洲鳗鲡(***)、花鳗鲡(***)、太平洋双色鳗鲡(*** pacifica)、欧洲鳗鲡(***)线粒体细胞色素B(cytochrome b,cyt b)基因的差异序列,基于5个cyt b基因序列差异较大的片段,设计多对引物,分别经过PCR验证和条件优化,挑选出4对引物:aj S1/A1、r-a S1/A2、bp-m S5/A3和m-a S4/A4。将这4对引物组合在同一个反应体系中进行PCR扩增,进行条件优化,筛选出组合PCR的最优条件:退火温度为58oC;退火时间为45s;循环数为27。结果表明,通过扩增产物凝胶电泳中条带的有无及大小可快速准确的鉴定出五个鳗鲡种类。本研究建立的组合PCR方法在3小时内可完成整个种类鉴定过程,同时可使用便携式小型仪器完成操作,可满足现场快速、高效鉴定的要求。此外,通过MEGA5.0软件构建5种鳗鲡线粒体cyt b基因序列NJ进化树,发现花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡先聚为一支,再与日本鳗鲡聚在一起,而欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡聚在一起,进化树图显示的遗传距离和它们的地理分布的远近相似。

摘要：在自行设计的循环水系统中研究了从菲律宾引进的花鳗鲡（Artguilla marmorata）和太平洋双色鳗鲡（Angttilla bieolor pacifica）混合苗种的培育效果。结果显示：苗种存活率为87．99％，日增重、特定生长率和饵料系数分别为0．011g／d、1．87％／d和9．59；鳗苗培育I期放养密度对日增重、特定生长率和饵料系数有显著性影响（P〈0．05），日增重和特定生长率随密度的增大而减小，饵料系数随密度的增大而升高；鳗苗培育Ⅱ期不同放养密度对两种规格鳗苗的日增重、特定生长率和饵料系数均无显著性影响（P〉0．05）。结果表明：自行设计的循环水养殖系统培育花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡的效果较好；鳗苗的放养密度在3638～4850ind／m^3是比较适宜的．

摘要：采用单因子试验设计方法,研究了饲料中添加多维对欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)生长性能、消化酶活性和免疫的影响。试验用鳗(5.93±0.02)g,分6组(每组3重复,每个重复30尾鱼),分别投喂添加不同浓度(0%,0.25%,0.50%,0.75%,1.00%,1.25%)的多维饲料42d。结果表明,随着多维添加水平的上升,各组鳗鲡增重率和特定生长率呈先升高后降低趋势,且差异显著(P0.05)。饲料中添加0.75%浓度的多维显著降低了鱼体水分含量,使鱼体粗蛋白和灰分含量得到显著提高(P0.05)。相比对照组,各添加组鳗鲡肠道胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性及血清超氧化物歧化酶、溶菌酶和碱性磷酸酶活性均得到显著提高(P<0.05),且0.75%组鳗鲡血清总蛋白浓度达到最大(P<0.05)。综合本研究结果可知多维在饲料中的适宜添加水平为0.75%。

摘要：建立了基于锁式探针的超分支滚环扩增检测嗜水气单胞菌的新方法。根据嗜水气单胞菌ARE基因上的一段高保守基因序列,设计锁式探针和对应的扩增引物,并优化了反应条件。探针在T4 DNA连接酶作用下,16℃连接1 h、63℃扩增1 h,其扩增产物电泳后得到明显条带。在8种水产养殖病原菌中,只有嗜水气单胞菌可以特异性检出,并且特异性良好,灵敏度(1.0×10^(3) cfu/mL)高于免疫法以及常规的PCR法。对嗜水气单胞菌人工感染的美洲鳗鲡肌肉样品进行检测,发现条带清晰可见。该方法的反应过程是在恒温条件下进行,不需要PCR仪,此外,样品处理过程简单,应用水煮法即可进行。

摘要：设计合成了一种配体4,7-二氯磺基苯-1,10-菲啰啉,将该配体同2-噻吩甲酰三氟丙酮(TTA)一起与稀土离子Eu3+进行螯合,得到新型稀土离子螯合物Eu(TTA)3(4,7-二氯磺基苯-1,10-菲啰啉),EuTBCP通过高分辨率质谱对新合成的配体及其螯合物的结构进行了表征.用生物素标记兔抗嗜水气单胞菌抗体,EuTBCP标记亲和素,建立了固相时间分辨荧光免疫法检测嗜水气单胞菌B11,检测限为1.0×105 cfu/mL.用该法检测了20份菌株B11人工感染的日本鳗鲡组织样品,包括肝、肾、肠、鳃和肌肉等组织,阳性检出率为75%.结果表明,新型螯合物EuTBCP具有良好的发光特性,可用于水产致病菌的检测,可望作为新型发光材料应用于其他领域的研究.

摘要：为优化诃子的鞣质类抗菌成分的萃取工艺,建立-种定量检测诃子萃取液中没食子酸质量浓度的高 效液相色谱法,其回归方程为4=92.48C-28.566,没食子酸质量浓度在4 - 2 0 μg ·ml^-1范围与峰面积呈良好的线 性关系.所用色谱柱为 Hypersil 0DS （ 4.0 mm×250 mm,5μm ） ,流 动 相 为 F（甲醇）： F （ 0 .1%磷酸 ）= 4 ： 9 6 ,检测 波长 270 mn,流速 1.0 mL · min^-1 ,柱温 25℃.同时利用该方法作为超声辅助萃取诃子没食子酸的评价指标,采用 正交实验设计优化获得最佳萃取工艺条件为溶剂60% 乙醇,料液比 1：2 0 ,温度 50℃：,萃取时间80min.