摘要：[目的]探究锦绣杜鹃(Rhododendron pulchrum Planch.)EST-SSR的类型、分布频率和分布特征,开发有效的SSR标记,并验证其在遗传多样性研究和跨物种转移中的应用潜力。[方法]采用RNA-seq技术对锦绣杜鹃‘紫鹤’品种的花蕾进行转录组测序,MISA软件对组装的unigenes内部的SSR位点进行检索,分析其类型、分布频率。利用Primer3.0软件设计引物,并对锦绣杜鹃群体和其近缘种映山红群体进行多样性检测,利用POPGENE-PC2.2软件计算等位基因数、有效等位基因数、多态性位点百分率、Shannon’s信息指数、Nei氏多样性指数、观察杂合度、期望杂合度等参数。[结果]锦绣杜鹃‘紫鹤’花蕾转录组共有49527个unigenes(43766249bp),从中筛选出16120个SSR位点(24.46%),发生频率为1·(2.7kb)^-1。微卫星的重复次数主要集中在524次之间,二核苷酸发生频率最高(9624个,59.70%),其次是单核苷酸(3738个,23.19%),频率最低的为五核苷酸(42个,0.26%)。频率最高的重复基序有A/T、AG/CT、AAG/CTT、AGG/CCT、ACC/GGT、AGC/GCT、AAAG/CTTT、AAGAG/CTCTT、AGAGGG/CCCTCT等。选用13个多态性SSR标记对锦绣杜鹃群体进行PCR扩增,共得到71个等位基因,平均每个位点3~9个;有效等位基因数在各SSR位点之间变化范围为1.684~5.930;观察杂合度HO和期望杂合度HE的变化范围分别为0.000~1.000和0.433~0.848,平均值分别为0.696±0.426和0.705±0.129;Shannon’s信息指数I和Nei氏多样性指数h的变化范围分别为0.736~1.961和0.406~0.831,平均值分别为1.376±0.339和0.683±0.131。此13个标记在映山红群体中的跨物种扩增成功率为100%,并反映出丰富的遗传多样性。2个群体间的遗传差异93.4%存在于群体内部。[结论]基于AG/CT重复基序开发的13个SSR标记具有高度的多态性,为后续杜鹃花属植物的遗传多样性研究、遗传图谱构建、基因定位、分子标记辅助育种等研究奠定了基础。大别山野生映山红资源具有较高的遗传多样性,且杂合度过剩,遗传变异主要发生在群体内部。

摘要：为确定罗田甜柿果实中总黄酮的最佳提取工艺条件及其抗氧化性,在单因素试验的基础上,通过Box-Behnken组合试验设计、响应面优化试验,得到柿果总黄酮提取的最佳条件:提取时间2.5 h,提取温度75℃,乙醇体积分数75%,液料比13∶1(m L∶g)。在此条件下,柿果总黄酮的提取率为2.27%。柿果总黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为89.72%,证实柿果具有一定抗氧化性。

摘要：以市售板栗为原料,以板栗浆持水力为依据,研究酶解条件对板栗浆稳定性的影响。在单因素试验基础上,选择酶解时间(min)、酶解温度(℃)、酶的添加量(U/g)进行响应面分析试验,运用Design-Expert软件设计3因素3水平的响应面分析试验,进行试验结果分析。通过建立二次回归方程,对响应面分析可得到板栗浆稳定性的最优酶解条件。结果表明:酶解时间为90 min,酶解温度为60℃,酶的添加量为7 U/g,在此条件下,板栗浆的持水力为53.09%。

摘要：以市售板栗为原料,以板栗浆持水力为依据,研究均质工艺对板栗浆稳定性的影响。在单因素试验基础上,选择均质温度、均质时间和均质转数进行响应面分析试验,运用Design-Expert软件设计的三因素三水平的响应面分析试验,进行试验结果分析。通过建立二次回归方程,对响应面分析可得到板栗浆稳定性的最优均质条件。结果表明,均质温度60℃,均质时间3 min,均质转数6 000 r/min,在此条件下,板栗浊汁饮料的持水力为42.7%。

摘要：蛋白质的突变体是研究其结构和功能的基础,文中旨在建立一种高效、快捷的多位点突变体构建方法。当要突变4个及以上相邻的氨基酸残基时,设计两长两短(长引物Ⅰ/Ⅰ、短引物Ⅱ/Ⅱ) 4条引物:长引物包含突变位点,且突变碱基数≤20 bp,短引物不包含突变位点;两条引物的GC含量≤80%、退火温度之差≤40℃,分别以Ⅰ/Ⅱ和Ⅰ/Ⅱ两对引物和模板进行两组反向PCR扩增。扩增后各体系均可得到含有突变位点的非甲基化线性质粒,且以Ⅰ/Ⅱ和Ⅰ/Ⅱ为引物扩增得到的两组线性质粒的断开位点分布在突变位点两侧。用DpnⅠ酶切回收后等摩尔比混合的PCR产物除去甲基化模板,再进行一轮变性和退火处理,两组线性质粒在95℃变性后互相以来自对方的单链DNA为模板退火形成开环质粒,转化大肠杆菌感受态细胞即可得到包含突变位点的转化子。结果表明,该方法可同时突变4–11个连续氨基酸残基(8–20 bp,将大幅简化多位点突变体的构建,从而进一步提高蛋白质结构和功能研究的效率。

摘要：为有效利用地方企业的金银花蒸馏剩余物,利用加工金银花露后的蒸馏残液为基质,以黑曲霉(Aspergillus niger)为优选转化总黄酮菌株,以总黄酮增量为评价指标,分别考察发酵时间、接种量、发酵温度、转速等因素对黑曲霉生物转化总黄酮的影响,并利用正交设计优化其转化条件。结果表明,黑曲霉生物转化金银花蒸馏残液中总黄酮的最佳工艺为发酵时间10 h,接种量0.92×106 CFU/mL,发酵温度30℃,转速200 r/min。在该优化条件下,金银花蒸馏残液中总黄酮增量可达2.54 g/L。该工艺简单有效,具有工业化应用前景,从而为金银花蒸馏剩余物的资源化利用提供实验依据。

摘要：为有效利用地方企业的金银花蒸馏剩余物,利用加工金银花露后的蒸馏残液为基质,并以绿原酸增量为评价指标,分别考察发酵温度、发酵时间、接种量、转速等因素对优选菌株转化绿原酸的影响,采用正交设计优化工艺条件。结果表明,优势菌株为枯草芽孢杆菌,其转化金银花蒸馏残液中绿原酸的最佳工艺为:发酵温度25℃,发酵时间8h,接种量1.44×10^7CFU/mL,转速150r/min。在该条件下,金银花蒸馏残液中绿原酸增量为(193.03±47.60)μg/mL。该工艺简单有效,可用于工业化生产,从而为金银花蒸馏剩余物的资源化利用提供了实验依据。

摘要：脂肪酶广泛应用于食品、药物、生物燃料、诊断、生物修复、化学品、化妆品、清洁剂、饲料、皮革和生物传感器等工业领域,微生物脂肪酶是商品化脂肪酶的重要来源。高温、酸性、碱性和有机溶剂等恶劣的工业生产环境使得脂肪酶的进一步工业应用受到限制,获取稳定性好的脂肪酶成为打破这一限制的关键环节。本文重点对提高微生物脂肪酶稳定性的策略进行了综述:挖掘极端微生物脂肪酶资源;利用定向进化、理性设计和半理性设计等蛋白质工程策略改造脂肪酶;利用物理吸附、封装、共价结合和交联等酶的固定化技术提高脂肪酶的稳定性;利用物理/化学修饰、表面展示以及多种改良策略相结合提高脂肪酶的稳定性。结合作者前期对酶工程的研究发现,新型酶催化剂的获得应该基于明确的设计思路,结合多种改造方法,基于定向进化-理性设计、定向进化-半理性设计、蛋白质工程-酶的固定化、蛋白质工程-物理/化学修饰、酶的固定化-物理/化学修饰等组合改造,比单一的改造方法具有更高的效率。

摘要：为探讨松针黄酮的最佳提取工艺,科学开发大别山野生松针资源,采用单因素试验筛选乙醇体积分数、提取时间、提取温度以及料液比等关键影响因素,以总黄酮得率为响应值设计响应面优化试验优化大别山野生松针中黄酮的提取工艺。结果表明,最佳提取工艺为提取温度80℃、提取时间100 min、料液比1∶32(g∶m L)、乙醇体积分数55%,该条件下总黄酮得率可达3.01%,其中料液比对总黄酮得率影响最为显著。

摘要：以麻城福白菊为原料,利用单因素试验及响应面试验设计优化微波辅助提取总黄酮工艺,并评价提取物的抗氧化活性。结果表明,福白菊总黄酮的最佳提取工艺为:料液比1:40(g:mL),微波提取时间60 s,微波功率400 W。此优化条件下,总黄酮得率为7.31%。抗氧化试验结果表明,当总黄酮类提取物质量浓度为0.010 g/L时,还原力为0.099,其总抗氧化能力最强;当其质量浓度为0.50 g/L时,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的能力最强,为77%。