摘要：为研究不同粗饲料组合类型对奶牛瘤胃甲烷产生量及氮代谢的影响。本试验采用单因素随机区组试验设计,将16头健康荷斯坦干奶牛随机分为4组。以东北地区常用的粗饲料及其组合设计4种粗饲料类型:A组(玉米青贮+玉米秸秆);B组(玉米青贮+羊草);C组(玉米青贮+玉米秸秆+羊草);D组(玉米青贮+苜蓿+羊草)。精饲料由玉米、麦麸、糖蜜、玉米纤维饲料、豆粕、棉籽粕和玉米胚芽饼为主要原料配制。试验结果表明:日粮A组奶牛干物质采食量(DMI)、总能及总氮摄入量均显著低于其他三种类型日粮组(P0.05)。日粮A、B组奶牛瘤胃甲烷的产生量(L/d)、以甲烷形式损失的能量(MJ/d)显著高于日粮C、D组(P0.05),其他各日粮类型组间差异显著(P0.05)。日粮D组奶牛粪氮和尿氮总量显著高于其他三种类型日粮组(P<0.05),分别较日粮A、B、C组高7.19%、8.35%和6.88%,但日粮B组与日粮D组的粪氮和尿氮总量占总摄入氮量的比例却显著低于日粮A组和日粮C组(P<0.05),其中日粮B组分别低于日粮A、C组5.58%和2.33%,日粮D组分别低于日粮A、C组6.04%和2.80%。由此可见,玉米秸秆与羊草混合使用时,将降低由玉米秸秆组成的日粮的CH4产量及氮的损失,而在最常用的粗饲料组合类型中,含有羊草与苜蓿的混合日粮向环境排放的CH4及日粮氮损失较少。

摘要：为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV和BPIV-3的双重PCR检测方法。采用该方法检测BRSV和BPIV-3参考毒株,特异性良好。对参考毒株进行梯度稀释检测,结果该方法检测BRSV的敏感性可达10 TCID50·100μL-1,BPIV-3可达10 TCID50·100μL-1。应用建立的双重PCR方法能够从临床样品中检测出BRSV和BPIV-3。表明建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,可用于BRSV和BPIV-3的临床检测。

摘要：为了探究转化生长因子-β激活蛋白1(TAK1)在牛疱疹病毒1型(BHV-1)感染中的作用,构建牛源TAK1基因慢病毒载体,筛选TAK1基因稳转过表达细胞株。根据GenBank中牛源TAK1基因序列(登录号:NM-001081595.1)设计引物,PCR扩增目的片段后插入载体中,构建pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,将其导入293T细胞进行慢病毒包装及滴度测定。用包装好的慢病毒感染牛肾上皮细胞(MDBK),筛选过表达TAK1基因的稳转细胞株,通过荧光显微镜和免疫印迹试验(Western blot)进一步验证该基因的过表达。重组质粒双酶切与测序结果表明成功建立了pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒。慢病毒滴度测定结果显示,过表达TAK1基因组病毒滴度为1.0×108 TU/mL,空载体对照组病毒滴度为5.0×108 TU/mL。重组慢病毒以MOI 180转染MDBK细胞,荧光显微镜观察到明显的红色荧光,表明慢病毒质粒转染成功。Western blot结果显示,在相应分子量处检测到目的条带,进一步表明TAK1基因被表达。成功构建了pCDH-CMV-TAK1-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro慢病毒质粒,并筛选出了过表达TAK1基因的MDBK稳转细胞株,为深入研究TAK1在BHV-1感染中机制的研究奠定基础。

摘要：羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染细胞过程中为了对抗宿主细胞的抗病毒作用,依靠种群长期培育的一系列功能性基因,如干扰素抗性基因、Bcl-2样基因和细胞周期蛋白抑制物基因等,遏制宿主细胞免疫清除和免疫调节作用。同时,ORFV也利用某种机制干预细胞泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)的信号调控途径,有效抑制胞内信号传导和CD8+T细胞活化,以庇护病毒粒子成熟和释放。本文综述了细胞UPS功能与病毒干预机制的内在联系及其相关元件的关键作用,探讨ORFV在选择压力下,主动采取的抑制宿主细胞免疫应答和设计胞内免疫逃逸的进化趋势。

摘要：采用单因素和正交试验设计,通过摇瓶培养对链霉菌菌株F-15产生抑菌活性物质的发酵条件进行优化。单因素试验结果表明,其最佳发酵条件为:玉米粉作碳源,KNO3作氮源,初始pH为7,培养时间为5 d,250 mL的摇瓶装液量为60 mL,接种量为150μL。优化后的培养基配比为:玉米粉3.0%、KNO33.0%、MgSO40.2%、NaCl 0.2%。

摘要：本试验旨在采用湿化学检测、模型预测及光谱分析对3个不同品种甜高粱(牛魔王、海牛和绿巨人)的营养价值进行评估。试验采用单因素试验设计,并用苜蓿干草作为正对照,玉米秸秆作为负对照,采用常规营养成分分析方法、康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)、能值估算、尼龙袋法、DVE/OEB 2010模型预测等方法对饲料的营养价值进行分析,同时利用红外光谱技术分析样本的蛋白质分子结构。结果表明:1)3个品种甜高粱的常规营养成分存在显著差异(P<0.05)。绿巨人的粗蛋白质、非蛋白氮和可溶性蛋白质含量最高;牛魔王的粗灰分、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸性洗涤木质素、淀粉、中性洗涤不溶蛋白质和酸性洗涤不溶蛋白质含量最高。2)绿巨人的慢速降解蛋白质组分、不可利用氮含量、不可降解碳水化合物组分及碳水化合物含量显著低于其他甜高粱样本(P<0.05)。3)绿巨人的可消化蛋白质、总可消化养分和能值显著高于其他甜高粱样本(P<0.05)。4)绿巨人的瘤胃可降解蛋白质含量在甜高粱饲料样本中最高,瘤胃可降解中性洗涤纤维含量最低。5)牛魔王和海牛的蛋白质降解平衡值为9.07~9.35 g/kg DM,绿巨人最高,为52.95 g/kg DM。6)蛋白质一级结构(酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带)和二级结构(α-螺旋和β-折叠)的光谱参数在不同饲料样本间存在显著差异(P<0.05)。由此可见,3个品种甜高粱的营养特性存在差异,绿巨人的营养价值相对较高。

摘要：为建立猪戊型肝炎病毒(SHEV)的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据SHEV基因ORF2保守区设计引物及探针,并对PCR反应条件进行优化。结果表明,该方法扩增的相关系数可达0.999,在102拷贝/μL^109拷贝/μL内具有良好的线性关系。对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病毒的RNA或DNA进行检测,结果均为阴性。该方法可以检出最低拷贝数为10拷贝/μL。重复性试验结果表明该方法的批内和批间变异系数均小于3.0%。本研究使用该荧光定量PCR检测方法对黑龙江省临床收集的131份样品(肝脏45份、粪便86份)进行检测,总阳性率为11.45%,其中肝脏阳性率为22.22%,粪便阳性率为5.81%。该方法的建立为SHEV的快速检出及绝对定量奠定了良好的基础。

摘要：试验采用逐步确定单一变量的设计,对影响重组乳酸菌生长的条件进行优化,确定其最佳生长培养基成分为:蔗糖10 g,蛋白胨10 g,牛肉膏10 g,酵母浸出物5 g,吐温80 1 m L,柠檬酸二铵2 g,CH_3COONa·3H_2O5 g,磷酸氢二钾1 g,盐液甲5.0 m L,蒸馏水1 000 m L;最佳生长环境为:pH为2.0～6.4,其中pH 3.0最佳,培养温度为37℃,培养时间为26 h,厌氧培养。

摘要：核心课程的建设在研究生教育中起到至关重要的作用。本文以高级植物生理学为例,分析该课程在研究生培养中的地位和作用。坚持以“立德树人”为人才培养核心理念,提出了核心课程建设思路。该思路将思政育人贯穿于课程教学始终,通过引入国家级精品课程、相关教学视频、原创教学资源、最新科研成果等,构建了线上教学资源。采用线上线下混合式教学模式,通过全过程评价和多元化考核方式提升了教学质量。通过以上课程建设,将专业知识与思政教育有机融合,有效地提升研究生的综合素质。

摘要：提取猪带绦虫激活和未激活六钩蚴总RNA,RT-PCR扩增HSP目的基因,将目的基因与pGH克隆载体连接,经酶切鉴定后,将阳性重组质粒进行测序,结果扩增出激活的六钩蚴的目的片段。将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-28a-HSP中,并将获得的pET28a-HSP阳性重组子转化至宿主菌***21,IPTG进行诱导表达,并对重组抗原pET-28a-HSP进行SDS-PAGE和Western-blot检测。结果表明重组经SDS-PAGE分析可见一条约35 kDa大小的融合蛋白条带的抗原,Western-blot结果显示其能被囊虫病人阳性血清识别。这将为进一步阐明六钩蚴入侵中间宿主的机理、设计新型抗猪囊虫病和绦虫病疫苗打下基础。