摘要：以半知菌属疣孢漆斑菌Myrothecium verrucaria NF-08为供试菌,采用响应面方法优化菌株产漆酶条件,并以其漆酶粗酶进行3种结构类型6种染料的脱色试验,考察了粗酶浓度、温度和p H值对脱色率的影响.两水平析因设计、中心组合设计和验证试验结果表明:葡萄糖浓度为15.4 g·L^(-1)、蛋白胨浓度为43.3 g·L^(-1)和培养基初始p H值为6.68时,漆酶活性达到最大值(25.58±1.60)U·m L^(-1),是单因素试验(16.82 U·m L^(-1))的1.52倍,提高了52.1%.以上述发酵条件获得的*** NF-08漆酶粗酶对3种结构类型染料均有脱色效果,排序为偶氮类优于芳甲烷类优于蒽醌类.脱色率随粗酶浓度增大(2~8 U·m L^(-1))、反应温度升高(15~35℃)而上升,随p H值上升(4~10)而下降.粗酶浓度为5 U·m L^(-1),反应温度为25℃,p H值为4时,偶氮类染料铬黑T和芳甲烷类染料碱性品红即可几乎完全脱色,脱色率分别为99.2%和94.6%.

摘要：用SPF鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)J1C7毒株。用纯化的病毒颗粒提取RNA基因组。根据已报道的IBDV JD1株的VP2序列设计引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)进行扩增,将获得的1 359 bp片段克隆于pMD 18-T载体上。经过限制性酶切及PCR鉴定后,得到阳性重组质粒。对VP2基因进行全序列测定表明,克隆的VP2基因长1 359 bp,编码452个氨基酸。J1C7株VP2蛋白高变区内两个亲水区与其他标准Ⅰ型毒株完全相同,而且具有弱毒疫苗株的特征性氨基酸:222P、256V、279N、284T、294L、299N,七肽区的氨基酸序列为SWS ARGS,因此,从分子水平上推断本研究的J1C7株为标准Ⅰ型毒株,且属于弱毒疫苗株。与已报道的IBDV VP2基因的氨基酸序列进行比对,结果表明,本研究的J1C7株与来自欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系。

摘要：用RSM法以MRS培养基为基础对副干酪乳杆菌HD1.7的液体培养基进行优化。首先采用Plackett-Burman试验设计筛选显著因子,确定了影响细菌素产生的主要成分:牛肉膏、葡萄糖、酵母粉;运用最陡爬坡试验逼近最大细菌素产生区域;利用RSM法对培养基进行优化。试验结果表明培养基最佳配方为酵母粉0.26%、牛肉膏0.88%、蛋白胨1.5%、葡萄糖2.45%、Mg-SO40.06%、K2HPO40.2%、吐温80 0.1%、MnSO40.005%、NaC l 0%。

摘要：为获得高GC含量(72%)的腺伴随病毒AAV反向末端重复序列ITRs(178 bp),以自行设计的4段寡核苷酸引物(约59 bp)为模板,采用融合PCR方法将其人工合成。回收目的片段后,通过TA克隆、PCR和酶切鉴定获得8个阳性转化子。经测序鉴定,得到了5个序列完全正确的克隆。本实验为研究含有ITRs的重组杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中表达持续时间的影响奠定了基础。

摘要：根据木糖醇脱氢酶基因序列相似的特点,设计1对引物获得Pichia stipitisCICC1960的木糖醇脱氢酶基因序列,此片段长度为1 092 bp,共编码363个氨基酸。利用生物信息学软件对该序列进行了同源性分析、氨基酸组成分析、疏水性分析、磷酸化位点预测、CDS分析及二、三级结构预测。结果表明,该片段为Pichia stipitis CICC1960的木糖醇脱氢酶基因序列。

摘要：采用微波法和响应面分析法（RSM）对中药紫苏籽中多糖的水提工艺进行了优化。紫苏籽经过粉碎和石油醚脱脂，在单因素实验基础上，选择微波提取功率及提取时间、液料比为自变量，用最陡爬坡路径逼近最大提取率区域后，利用响应面中心组合优化设计了紫苏多糖的最佳水提工艺。结果表明：紫苏多糖的最佳水提工艺为微波功率610 W，微波提取时间1.31 min、液料比28.5∶1，紫苏多糖的提取率为1.99%，并对响应面法优化的提取工艺进行了验证，相差率为0.3%。本结论为紫苏多糖的研究提供了一种方便快捷的提取方法。

摘要：采用响应面法对植物乳杆菌冻干保护剂配比进行优化。在单因素试验的基础上,首先利用Plackett-Burman设计法研究保护剂对响应值的影响程度,发现脱脂乳、甘油和VC对细胞存活率的影响显著,然后利用最陡爬坡法逼近最大响应区域,最后在上升最高点处由中心组合试验和响应面分析确定其最优保护剂复配比例,即脱脂乳、甘油和VC的质量浓度分别为13.68g/100mL、1.97g/100mL和0.20g/100mL,并通过实验测得优化后的细胞存活率为85.01%,与预测值84.85%非常接近,植物乳杆菌含菌量为4.98×1010CFU/g,而加单一保护剂时的细胞存活率最高值为52%,存活率提高了63.48%。

摘要：提高酸黄瓜的发酵效率,推动酸黄瓜工业化生产,优化发酵工艺是提升其发酵品质的重要手段。利用单因素发酵条件优化和正交试验设计优化副干酪乳杆菌HD1.7(Lactobacillus paracasei HD 1.7)酸黄瓜发酵的工艺参数,并测定酸黄瓜发酵过程中的还原糖、蛋白质、氨基态氮和亚硝酸盐含量,探究酸黄瓜的品质。结果表明:当食盐浓度4%,接种量1%,发酵温度18℃,发酵时间3 d的条件下酸黄瓜发酵效果最佳。加菌发酵酸黄瓜的品质优于自然发酵酸黄瓜,在发酵初期,HD 1.7酸黄瓜的还原糖含量增加23%(0.87 g/100 g),蛋白质残留量减少2.3%(0.01 g/100 g),氨基态氮残留量增加30%(0.01 g/100 mL),亚硝酸盐含量降低18%。因此,添加L. paracasei HD 1.7对酸黄瓜发酵过程中理化性质有影响,可提升酸黄瓜的品质、风味、缩短生产周期。

摘要：【目的】选育高产紫杉醇菌株,并构建选育到的高产紫杉醇菌株与出发菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库。【方法】分别采用硫酸二乙酯和紫外线与硫酸二乙酯复合诱变处理菌株HD1-3孢子;以选育到的高产紫杉醇菌株为tester,菌株HD1-3为driver,应用抑制性消减杂交技术构建选育到的高产紫杉醇菌株与菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库。【结果】试验确定的Nodulisporium sylviforme紫杉醇产生菌HD1-3孢子复合诱变的适宜条件为:将106 cfu/mL孢子悬液经过8%硫酸二乙酯处理15 min后,在电磁搅拌下,用紫外灯(30 w,距离30 cm)照射处理45 s,获得了1株遗传性状稳定、高产紫杉醇的突变株——UD14-11,其紫杉醇产量从出发菌株HD1-3的232.73±4.61μg/L提高至312.81±7.51μg/L;构建的文库滴度为1.2×107 cfu/mL,阳性克隆率75.3%,片段大小主要集中在300 bp-1.0 kb。【结论】选育到了1株遗传性状稳定、高产紫杉醇突变株;成功地构建了高产紫杉醇菌株UD14-11与菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库,为寻找、分离微生物生物合成紫杉醇相关基因和利用基因工程或代谢工程手段定向设计改造菌株奠定基础。

摘要：以Klebsiella oxytoca(***)HD79为出发菌株,根据α-乙酰乳酸脱羧酶基因序列相似的特点,利用Primer5.0设计一对引物,以*** HD79为模板,PCR扩增,获得*** HD79基因片段Bud A,此片段经测序显示长度为780 bp,无碱基缺失。利用生物信息学软件对该序列进行了同源性分析、氨基酸组成分析、疏水性分析、磷酸化位点预测、亚细胞定位分析及二、三级结构预测。结果表明,该片段为*** HD79的α-乙酰乳酸脱羧酶基因序列。对该酶进行的生物信息学特异性分析为其构建产2,3-丁二醇的工程菌株提供一定的理论参考。