摘要：甜菜M14品系是利用野生白花甜菜(Beta corolliflora Zoss.)与栽培甜菜(Beta vulgaris L.)进行种间杂交及回交获得的附加有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有野生白花甜菜的一些优良性状。本研究利用抑制消减杂交技术,以未处理的甜菜M14品系叶片作为Driver,以500 mmol·L-1NaCl处理的甜菜M14品系叶片作为Tester,构建了盐胁迫下甜菜M14品系抑制消减cDNA文库;以地高辛为标记物,进行反向Northern Blot杂交筛选并测序,共获得盐胁迫下甜菜M14品系特异ESTs序列449个,组装后共得到58条Unigenes,并将测序所得结果进行了GO分类。该研究为进一步鉴定和挖掘甜菜M14品系新的优质基因资源奠定了基础。

摘要：采用超声波辅助纤维素酶法优化毛果鱼藤总黄酮的提取工艺,并研究其抗氧化活性。在单因素实验基础上,通过Box-Behnken进行实验设计,获得最优提取条件,提高毛果鱼藤总黄酮提取率;采用羟基自由基、DPPH自由基清除法和总还原力测定抗氧化活性。结果表明:总黄酮最佳提取工艺为纤维素酶质量分数0.31%,乙醇体积分数85%,液料比为40:1 m L/g,超声时间为37min,酶解时间2 h,酶解温度49.2℃;在最优条件下,提取率为30.364 mg/g。毛果鱼藤总黄酮清除羟基自由基及DPPH自由基的IC50为1.17 mg/m L和0.18 mg/m L。超声波辅助纤维素酶法对毛果鱼藤总黄酮的提取率显著增加,且毛果鱼藤总黄酮具有良好的抗氧化活性。

摘要：根据木糖还原酶基因序列相似的特点,设计一对引物获得PichiastipitisCICC1960的一段基因片段,此片段长度为957bp,共编码318个氨基酸。利用生物信息学软件对该序列进行了同源性分析、氨基酸组成分析、疏水性分析、磷酸化位点预测、CDS分析及二、三级结构预测。结果表明该片段为Pichia stipitis CICC1960木糖还原酶基因序列。

摘要：根据HPK10亚家族氨基酸序列相似的特点,设计2对引物获得Lactobacillus paracasei HD1.7的HPK10亚家族保守区域序列,此片段长为330bp。根据此序列进行比对分析并设计简并引物,扩增获得整个响应调节蛋白(RR)序列,长为807bp。利用生物信息学软件对此序列进行了同源性分析、氨基酸组成分析、疏水性分析、磷酸化位点预测、CDS分析及二、三级结构预测。结果表明,该克隆片段为*** HD1.7的响应调节蛋白。

摘要：根据木糖醇脱氢酶基因序列相似的特点,根据树干毕赤酵母(***),热带假丝酵母(Candida tropicalis)设计1对简并引物获得*** HDYXHT-01木糖醇脱氢酶基因的序列,此片段长为1095bp。利用生物信息学软件对此序列进行了同源性分析、氨基酸组成分析、疏水性分析、磷酸化位点预测、CDS分析、二级结构预测。结果表明,该克隆片段为*** HDYXHT-01木糖醇脱氢酶基因的序列。

摘要：昆虫细胞色素P450是一类在生物代谢中起重要作用的基因家族,承担着许多重要的生理功能,包括对植物次生物质代谢和杀虫剂解毒等.本研究以玉米螟5龄幼虫中肠的总RNA为模板,根据不同昆虫P450基因家族保守氨基酸序列,设计并合成简并引物,利用RT-PCR扩增出了玉米螟细胞色素P450基因cDNA片段,将其克隆到pMD19-T载体进行序列测定.测序获得了编码213个氨基酸残基的641 bp的DNA片段,命名为OfP450(GenBank登录号:EU807990);与已公布的棉铃虫、家蚕、欧洲防风草结网毛虫、小菜蛾和黑腹果蝇等的细胞色素P450氨基酸序列进行比较,其一致性分别为55%、50%、49%、44%和31%.将植物次生物质棉酚、丁布添加入人工饲料中,对玉米螟进行了饲喂实验,采用优化半定量RT-PCR,以18SrRNA为内标,RT-PCR检测进食棉酚、丁布植物化合物的玉米螟中肠P450基因的转录.结果表明,其转录水平能被棉酚、丁布显著诱导.提示本实验克隆的玉米螟细胞色素P450对植物次生物质的代谢作用与P450表达量呈正相关.该研究为下一步将植物介导的RNA干扰技术应用于害虫生物防治提供坚实的基础.

摘要：旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除酿酒酵母甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2),探究其对2,3-丁二醇产量的影响。根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W5甘油-3-磷酸脱氢酶基因(gpd2)设计供体片段及gRNA片段,将gRNA片段与可表达Cas9蛋白的敲除载体相连,之后将重组质粒及供体DNA片段转化到*** W5细胞中,根据表型筛选及PCR验证获得gpd2基因缺失菌株。结果表明目的基因gpd2敲除成功,基因缺失菌株与原始菌株经发酵实验相比,甘油产量下降22.01%,乙醇产量提高24.65%,2,3-丁二醇产量下降10.60%。gpd2基因的敲除并没有提高2,3-丁二醇的产量,原因可能是逐渐积累的NADH会优先被细胞内大量的乙醇脱氢酶所氧化,作用于乙醇的产生,而不是优先作用于2,3-丁二醇的合成。本实验构建了适用于酿酒酵母的基因敲除系统,该系统对进一步探究酿酒酵母其他代谢产物与2,3-丁二醇合成之间的关系具有实际的借鉴意义。

摘要：目的:以酿酒酵母W5为出发菌株,对其核酸内切酶基因HO进行克隆及生物信息学分析。方法:首先运用Primer 5.0软件,设计一对扩增HO基因序列的引物,并以酿酒酵母W5全基因组为模板进行PCR扩增,获得酿酒酵母W5核酸内切酶HO基因片段,利用生物信息学技术对该序列进行验证及分析。结果:测序显示HO基因长度为1760 bp,无碱基缺失,且该基因序列具有完整的开放读框。该基因编码的HO蛋白包含586个氨基酸残基,强酸性和强碱性氨基酸残基数量有明显差异;HO蛋白等电点为9.56,存在激酶位点,疏水性最大值为1.722,亚细胞定位预测其位于细胞核内,属于碱性胞内蛋白质,并构建了其空间结构模型。结论:对酿酒酵母W5核酸内切酶HO基因序列进行了克隆及生物信息学分析,所得数据可为酿酒酵母遗传背景研究提供一定的理论支持。

摘要：通过对休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)HDYXHT-01的耐水解液毒性驯化,筛选出一株具有较高乙醇生产强度以及较高水解液毒性物质耐受能力的驯化菌株*** YHX-9。乙醇生产强度为0.495 g·L^(-1)·h^(-1),是出发菌株(0.426 g·L^(-1)·h^(-1))的1.16倍,乙酸耐受极限为4 g·L^(-1),糠醛耐受极限为5 g·L^(-1),分别较驯化前提高了1.33倍和1.25倍。为了进一步提高该菌株发酵玉米芯半纤维素水解液产乙醇的能力,对水解液发酵条件进行优化。优化后的条件为:水解液浓缩倍数为3倍(含葡萄糖5.12 g·L^(-1),木糖68.7 g·L^(-1),阿拉伯糖10.19 g·L^(-1)),装液量为60 mL/250 mL,发酵时间为64 h,pH为5.4,接种量为8%。经过优化,乙醇平均产量达到了27.01 g·L^(-1),是未经工艺优化前最高产量23.90 g·L^(-1)的1.13倍,为进一步利用***进行乙醇生产奠定了坚实的基础。

摘要：木糖还原酶氧化木糖生成木糖醇,处于木糖代谢的节点位置。酿酒酵母自身不具有木糖还原酶,不能利用木糖生产乙醇。因此,可以在酿酒酵母体内引入木糖还原酶基因xyl1,完善木糖代谢流,提高酿酒酵母的木糖利用率和乙醇得率。本研究利用PCR方法,根据木糖还原酶基因xyl1序列相似的特点,设计1对引物,以休哈塔假丝酵母基因组DNA和质粒PKT0150为模板,克隆得到了木糖还原酶基因xyl1,长度为1110 bp,有3个碱基缺失,ORF位于11-982位,全长为972 bp,编码323个氨基酸,缺失的3个碱基TTG位于ORF后10、11、12位。结果表明该片段为HDYXHT-20335木糖还原酶基因序列,为构建利用木糖高产乙醇的酵母菌奠定一定基础。