摘要：甜菜M14品系是带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体附加系,其染色体组成中除了包含18条栽培甜菜染色体外,还附加有白花甜菜第9号染色体,具有无融合生殖特性,无融合生殖能够固定杂种优势。在前期工作中,通过SSH、RACE等技术获得了甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox的cDNA全长。通过6种限制性内切酶分别酶切M14品系基因组总DNA,再与相应接头连接,构建了6个DNA步移文库。根据基因BvM14-MADSboxcDNA序列设计引物,通过染色体步移技术克隆出该基因的上游DNA序列。经生物信息学分析,推测获得了BvM14-MADSbox基因上游1 718 bp的启动子序列,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CAAT-box,和ARE、ERE、HSE、ABRE、CGTCA-motif等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件。该结果为今后BvM14-MADSbox基因的时空特异性表达调控机制奠定基础。

摘要：甜菜M14品系是利用野生白花甜菜(Beta corolliflora Zoss.)与栽培甜菜(Beta vulgaris L.)进行种间杂交及回交获得的附加有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有野生白花甜菜的一些优良性状。本研究利用抑制消减杂交技术,以未处理的甜菜M14品系叶片作为Driver,以500 mmol·L-1NaCl处理的甜菜M14品系叶片作为Tester,构建了盐胁迫下甜菜M14品系抑制消减cDNA文库;以地高辛为标记物,进行反向Northern Blot杂交筛选并测序,共获得盐胁迫下甜菜M14品系特异ESTs序列449个,组装后共得到58条Unigenes,并将测序所得结果进行了GO分类。该研究为进一步鉴定和挖掘甜菜M14品系新的优质基因资源奠定了基础。

摘要：甜菜M14品系是由栽培甜菜和野生白花甜菜杂交后获得的带有野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有抗逆、无融合等优良特性。在前期工作中,对盐胁迫下叶片膜蛋白进行了定量蛋白质组学分析,与未处理对照相比,200、400mM盐胁迫下共获得50个差异蛋白质点,选择其中3个蛋白质点为研究对象,与实验室前期相同盐处理下获得的转录组数据库相匹配,获得基因cDNA全长,将此3个基因命名为BvM14-ATPaseF、BvM14-ATPaseH和BvM14-PsaD;进行在线功能预测;设计引物,对盐胁迫(0、200、400 mM)处理下此3个基因进行实时荧光定量分析,了解在盐胁迫下基因转录与蛋白水平上表达量的关系。结果表明,与未处理对照相比,200、400 mM盐浓度处理下BvM14-ATPaseF基因分别上调3.70与4.47倍,BvM14-ATPaseH基因在盐胁迫处理下分别上调0.85与1.36倍,而BvM14-PsaD基因随着盐浓度的增加却下调0.97与2.54倍,表明在盐胁迫下不同基因具有的功能不同,而导致转录水平与蛋白水平的表达量并不完全相同。

摘要：甜菜M14品系是在二倍体栽培甜菜染色体组上附加野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有耐盐性、无融合生殖等优良性状,是发掘优质基因资源的良好研究材料。实验室前期已利用i TRAQ串联LC-MS/MS技术获得0、200、400 m M Na Cl胁迫下叶中差异表达蛋白质76个;与利用Hiseq 2000高通量测序技术构建的Na Cl(0、200、400 m M)胁迫下甜菜M14品系转录组数据库相匹配,得到了3条参与抗氧化酶系统的Bv M14-APX、Bv M14-DHAR3及Bv M14-MDAR的Unigenes序列。对3条Unigenes序列进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR技术对0、200、400 m M Na Cl胁迫下叶和根中的3条基因进行组织特异性分析,探究3条基因在叶和根中的表达趋势,并比较了叶中3条基因在转录水平和蛋白水平的表达量变化是否一致,借以评估3条基因对Na Cl胁迫的响应。实时荧光定量PCR结果表明,Bv M14-APX基因在200 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调21.56、3.56倍;400 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调51.27、11.47倍。Bv M14-DHAR3基因在200 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调14.52、1.83倍;400m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调22.78、5.1倍。Bv M14-MDAR基因在200 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调29.04、1.33倍;400 m M Na Cl胁迫下叶和根中分别上调59.3、3.81倍。3条基因在响应Na Cl胁迫过程中,叶中的表达量变化均显著于根,同时叶中转录水平与蛋白表达水平的变化具有一致性,说明这3条基因在抗氧化酶系统中起到了重要的作用,这也为进一步探究Bv M14-APX、Bv M14-DHAR3及Bv M14-MDAR基因间互作关系奠定了基础。

摘要：甜菜M14品系是在栽培甜菜染色体基础上附加了野生白花甜菜第9号染色体的单体附加系,具有抗逆、无融合生殖等优异特性。在前期工作中,通过RACE技术获得了甜菜M14品系硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase,Tpx)编码基因BvM14-Tpx的cDNA全长,此基因参与各种过氧化物的清除反应从而提高植物的抗逆性。构建了BvM14-Tpx基因的大肠杆菌表达体系,对转BvM14-Tpx基因的大肠杆菌BL21(DE3)菌体在H2O2胁迫下的生长曲线进行了测定,结果显示转基因菌株比对照菌株提前1h进入生长期,说明BvM14-Tpx基因能够缓解H2O2对大肠杆菌生长的抑制;同时构建了BvM14-Tpx基因的酿酒酵母表达体系,对H2O2及NaCl胁迫下的转基因酿酒酵母的研究表明,转基因酵母的生长好于对照,说明BvM14-Tpx基因可以提高转基因酵母的抗氧化及耐盐能力。

摘要：该试验以哈尔滨市售镜鲤(Cyprinus carpio ***)为原料制备冷冻鱼糜,选择常用抗冻剂:蔗糖、木糖醇、山梨醇、焦磷酸钠,通过四因素三水平的试验设计方法,以鱼糜巯基含量为考察指标,得到适用于镜鲤鱼糜的复合抗冻剂配方为4%木糖醇,2%山梨醇,2%蔗糖,0.5%焦磷酸钠。

摘要：探究东北地区栽培甜菜直接再生体系的建立,以期为基因工程手段培育甜菜品种奠定基础。本研究以甜菜子叶节和叶柄为外植体,研究不同消毒方法、不同激素水平对诱导甜菜不定芽和不定根再生的影响。结果表明,最佳消毒方法为:剥除种球外壳获取种胚,并使用75%酒精30 s+0.1%HgCl25 min消毒;诱导不定芽的最佳激素配比为:MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L,在此培养条件下,子叶节和叶柄的不定芽诱导率均达到最大值,分别为14.44%、11.67%;诱导不定根的最佳激素配比为:1/2MS+NAA 0.05 mg/L,诱导率达到93.33%。本研究初步建立了东北甜菜直接再生体系,为下一步建立遗传转化体系及甜菜遗传改良奠定基础。

摘要：甜菜M14品系富含丰富的优质基因资源,对盐、寒冷、干旱等非生物胁迫具有极强的耐受性,是研究逆境胁迫极为难得的材料。课题组前期以甜菜M14品系为试验材料,在500mmol/L NaCl胁迫下,从蛋白质水平筛选获得了76个差异蛋白质点,在转录水平筛选获得了58个Unigenes序列,二者匹配得到了蛋白质点——BvM14-SAMS2。试验采用RACE技术,克隆获得甜菜M14品系BvM14-SAMS2基因cDNA全长1 538bp,包含最大开放阅读框ORF 1 182bp,编码393个氨基酸。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对甜菜M14品系BvM14-SAMS2基因的表达特异性进行分析,结果表明,在正常生长条件下,BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系根、茎、叶、花中的表达量大小依次为:根>叶>花>茎。受盐胁迫诱导,BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系叶片中的表达量随着盐浓度的增大而增大,根中的表达量随着盐浓度的增大无明显变化。研究结果表明,BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系叶片中受盐胁迫诱导表达,该基因在胁迫下的表达量增加可能有利于植物抵御盐胁迫损伤。