摘要：旨在进一步研究BvM14-STPK蛋白激酶对盐胁迫的应答反应,本研究以甜菜M14品系为材料,使用特异性引物通过聚合酶链式反应进行扩增,获得BvM14-STPK基因cDNA全长,并进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR探究该基因响应盐胁迫的表达分析。生物信息学分析结果表明,BvM14-STPK基因cDNA全长1668 bp,包含1527 bp的最大ORF,编码508个氨基酸;BvM14-STPK蛋白激酶具有典型的蛋白激酶保守结构域。实时荧光定量PCR结果表明,BvM14-STPK基因在甜菜M14品系叶、根中均有广泛表达,叶中的表达量高于根中。该基因在200、400 mmol/L NaCl处理下,在叶片和根中呈现不同的表达状态,表明该基因可以应答盐胁迫,但在不同组织中应答盐胁迫的表达量存在差异。本项研究在挖掘甜菜M14品系优质基因和提高栽培甜菜抗逆性等方面具有重要指导意义,为进一步开展甜菜遗传改良工作奠定基础。

摘要：甜菜M 14品系富含丰富的优质基因资源，对盐、寒冷、干旱等非生物胁迫具有极强的耐受性，是研究逆境胁迫极为难得的材料。课题组前期以甜菜M14品系为试验材料，在500 mmol/L NaCl胁迫下，从蛋白质水平筛选获得了76个差异蛋白质点，在转录水平筛选获得了58个 Unigenes序列，二者匹配得到了蛋白质点---BvM14-SAMS2。试验采用RACE技术，克隆获得甜菜M14品系BvM14-SAMS2基因cDNA全长1538 bp ，包含最大开放阅读框ORF 1182 bp ，编码393个氨基酸。采用实时荧光定量PCR （Real-time PCR）技术对甜菜M14品系 BvM14-SAMS2基因的表达特异性进行分析，结果表明，在正常生长条件下， BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系根、茎、叶、花中的表达量大小依次为：根＞叶＞花＞茎。受盐胁迫诱导， BvM14-SAMS2基因在甜菜M 14品系叶片中的表达量随着盐浓度的增大而增大，根中的表达量随着盐浓度的增大无明显变化。研究结果表明， BvM14-SAMS2基因在甜菜M14品系叶片中受盐胁迫诱导表达，该基因在胁迫下的表达量增加可能有利于植物抵御盐胁迫损伤。

摘要：为从分子生物学角度进一步研究H5N1型禽流感主要抗原HA基因,探究H5N1HA基因的遗传变异情况及其蛋白结构,根据GenBank中登录的H5N1型禽流感HA基因的序列利用Primer5.0设计引物扩增HA基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行鉴定,对鉴定正确的重组质粒pMD-H5N1-HA进行测序分析。应用生物信息学软件对禽流感病毒HA基因进行系统进化树分析、氨基酸序列同源性分析、保守区分析,磷酸化位点和序列重复区分析及HA蛋白二级、三级结构的预测。核苷酸序列测定结果表明:HA基因长1661bp,共编码326个氨基酸;生物信息学分析结果表明:HA基因在种间具有较高保守性,HA基因的氨基酸序列与其他地方性禽流感H5N1病毒株HA基因的序列同源性最高可达99.7%,且为高致病性毒株;HA蛋白的二级、三级结构预测结果显示:HA蛋白多为α螺旋和β转角结构,无规则卷曲,是亲水性蛋白。该结果为禽流感病毒的分子病毒学研究奠定了基础。

摘要：通过活性污泥在低温(4-8℃)下的驯化、培养和分离,得到6株低温耐冷菌.采用固定化技术将其固定在聚氨酯填料上.提高了生物法处理低温生活污水的效率,COD去除率提高了30%.同时解决了常规固定化颗粒易破碎而无法实现工程应用的问题.通过对耐冷菌生物膜生物量和酶活性分析,探讨了固定化混合耐冷菌处理低温废水的机理.

摘要：昆虫细胞色素P450是一类在生物代谢中起重要作用的基因家族,承担着许多重要的生理功能,包括对植物次生物质代谢和杀虫剂解毒等.本研究以玉米螟5龄幼虫中肠的总RNA为模板,根据不同昆虫P450基因家族保守氨基酸序列,设计并合成简并引物,利用RT-PCR扩增出了玉米螟细胞色素P450基因cDNA片段,将其克隆到pMD19-T载体进行序列测定.测序获得了编码213个氨基酸残基的641 bp的DNA片段,命名为OfP450(GenBank登录号:EU807990);与已公布的棉铃虫、家蚕、欧洲防风草结网毛虫、小菜蛾和黑腹果蝇等的细胞色素P450氨基酸序列进行比较,其一致性分别为55%、50%、49%、44%和31%.将植物次生物质棉酚、丁布添加入人工饲料中,对玉米螟进行了饲喂实验,采用优化半定量RT-PCR,以18SrRNA为内标,RT-PCR检测进食棉酚、丁布植物化合物的玉米螟中肠P450基因的转录.结果表明,其转录水平能被棉酚、丁布显著诱导.提示本实验克隆的玉米螟细胞色素P450对植物次生物质的代谢作用与P450表达量呈正相关.该研究为下一步将植物介导的RNA干扰技术应用于害虫生物防治提供坚实的基础.

摘要：探究东北地区栽培甜菜直接再生体系的建立,以期为基因工程手段培育甜菜品种奠定基础。本研究以甜菜子叶节和叶柄为外植体,研究不同消毒方法、不同激素水平对诱导甜菜不定芽和不定根再生的影响。结果表明,最佳消毒方法为:剥除种球外壳获取种胚,并使用75%酒精30 s+0.1%HgCl25 min消毒;诱导不定芽的最佳激素配比为:MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L,在此培养条件下,子叶节和叶柄的不定芽诱导率均达到最大值,分别为14.44%、11.67%;诱导不定根的最佳激素配比为:1/2MS+NAA 0.05 mg/L,诱导率达到93.33%。本研究初步建立了东北甜菜直接再生体系,为下一步建立遗传转化体系及甜菜遗传改良奠定基础。

摘要：为获得纯化的BvM14-STPK蛋白激酶,采用低温16℃,0.5 mmol/L IPTG对转Bv M14-STPK的大肠杆菌进行诱导,利用Ni2+亲和层析技术对菌液上清进行纯化,并利用SDS-PAGE对纯化蛋白进行检测。结果表明37℃,0.5 mmol/L IPTG诱导后,BvM14-STPK蛋白以包涵体形式存在,不能对目的蛋白进行纯化分析研究;通过优化诱导条件,在低温16℃,0.5 mmol/L IPTG过夜诱导,在上清中获得大量BvM14-STPK可溶性目的蛋白,对菌液上清纯化并经SDS-PAGE检测到BvM14-STPK目的蛋白。在目的蛋白纯化过程中,发现150 mmol/L咪唑洗脱液纯化BvM14-STPK目的蛋白效果最好。本研究成功纯化出目的蛋白BvM14-STPK。

摘要：为进一步探究BvM14-STPK蛋白激酶在甜菜中应答盐胁迫的信号途径,本研究对BvM14-STPK蛋白激酶进行了互作蛋白的鉴定及筛选。使用转基因技术获得转基因烟草,使用亲和纯化串联质谱技术鉴定蛋白复合物,通过搜索烟草蛋白质数据库,获得BvM14-STPK蛋白激酶的候选互作蛋白;使用实验室甜菜M14品系盐胁迫转录组数据,对得到的互作蛋白的编码基因进行盐胁迫下的转录水平分析。结果表明,在烟草数据库中,非盐处理条件下获得3个BvM14-STPK蛋白候选互作蛋白质,盐处理条件下获得6个候选互作蛋白质;经过盐胁迫转录组数据分析,发现有4个互作蛋白编码基因在不同的组织部位、不同的盐浓度条件下应答盐胁迫。为后续进一步在植物体内验证BvM14-STPK蛋白激酶与候选互作蛋白的相互作用及甜菜抗盐机理奠定良好的基础。

摘要：本文对黑龙江省呼中自然保护区的自然地理条件和生物多样性做出简要概况,并对保护区基本现状进行有效评价,总结出保护区建设和管理中存在的主要问题。根据国家生态保护和可持续绿色发展战略的需要和目前保护区所存在的问题,提出了保护区发展规划的总体布局、项目规划以及效益评价等。为呼中自然保护区整体建设提供科学依据和参考,提高保护区生物多样性,促进大兴安岭地区经济与社会可持续发展。

摘要：木糖还原酶氧化木糖生成木糖醇,处于木糖代谢的节点位置。酿酒酵母自身不具有木糖还原酶,不能利用木糖生产乙醇。因此,可以在酿酒酵母体内引入木糖还原酶基因xyl1,完善木糖代谢流,提高酿酒酵母的木糖利用率和乙醇得率。本研究利用PCR方法,根据木糖还原酶基因xyl1序列相似的特点,设计1对引物,以休哈塔假丝酵母基因组DNA和质粒PKT0150为模板,克隆得到了木糖还原酶基因xyl1,长度为1110 bp,有3个碱基缺失,ORF位于11-982位,全长为972 bp,编码323个氨基酸,缺失的3个碱基TTG位于ORF后10、11、12位。结果表明该片段为HDYXHT-20335木糖还原酶基因序列,为构建利用木糖高产乙醇的酵母菌奠定一定基础。