摘要：目的检测福建省一范德伍兹综合征(VWS)家系IRF6基因的突变。方法在IRF6(interferonregulatoryfactor6)基因内设计引物,经分段聚合酶链反应(PCR)和DNA测序进行突变检测,运用PIX-ProteinIdentification软件对检测结果进行蛋白二级结构分析。结果在所有患者IRF6基因的第379密码子发现TGG>TGA(r.1400g→a)的碱基变化,该突变引入终止码,引起IRF6蛋白转录提前终止。结论范德伍兹综合征由IRF6基因突变引起,IRF6基因与唇腭、牙齿发育密切相关。

摘要：背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在体内生长情况。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用36只同种异体新西兰兔为受者,45只新生1周龄青紫蓝兔为供者,雌雄均不限。购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;细胞培养基DMEM、胎牛血清、G418、Polybrene购自GIBCO BRL。方法:实验于2000-01/2005-07在原上海第二医科大学完成。摸球法随机将新西兰兔分为3组:同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组。每组各12只。利用重组逆转录病毒载体转染的青紫蓝兔软骨细胞和组织工程材料pluronic F-127复合物构建兔同种异体组织工程软骨。①移植物观察其大体观察与质量变化:各组均将相应材料注入新西兰白兔的皮下,移植接种后1,2,3个月取出移植物观察其大体观察与质量变化。②染色观察:移植接种后1,2,3月取出移植物,切片,行苏木精-伊红、Safranin’O、Masson’s trichrome染色观察。③抗体检测:移植接种后1,2月抽血1mL,将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,于琼脂糖介质中电泳分离,与受者新西兰兔血清作用,观察有无相应抗体产生。④补体依赖细胞毒实验:将青紫蓝兔的软骨细胞制备成2×109L-1的细胞悬液,接种于96孔板上,贴壁生长24h,加受者新西兰兔血清进行细胞毒试验,在显微镜下计数凋亡细胞的百分率。主要观察指标:①两组移植物的大体观察与质量变化。②组织学变化。③抗体检测结果。④凋亡细胞的百分率。结果:纳入实验兔81只均进入结果分析。①移植物的大体观察与质量变化:接种2周后,同种异体软骨细胞-FasL组及同种异体软骨细胞组兔接种细胞-材料复合物处,均有明显的结节形成,对照组未形成接节。同种异体软骨细胞组新生软骨组织随时间推移有逐渐缩小的趋势,并在第4个月后完全消失。同种异体软骨细胞-FasL组虽也有缩小的趋势,但7个月后尚存。同种异体软骨细胞-FasL组移植物质量高于同种异体软骨细胞组(P<0.05)。②组织学观察:同种异体软骨细胞组软骨组织周围可见大量的淋巴细胞浸润,同种异体软骨细胞-FasL组明显减少。软骨细胞内部,未见淋巴细胞侵入。麦松染色,光镜下观察,中部小部分白色为未成熟的软骨细胞,大部分成熟软骨细胞周围有染成绿色的胶原分泌。Safranin’O染色呈强阳性反应,表明基质中富含糖胺多糖。③抗体检测:将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,与受者新西兰兔血清作用,显示相应无抗体产生。④凋亡细胞的百分率:结果同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组血清CDC凋亡细胞的百分率分别为5%,6%和1%,均为阴性。结论:FasL基因重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨,且能延迟退化3个月。

摘要：目的:制备特异性白念珠菌外排泵(CaCDR1和CaCDR2)的多克隆抗体,为研究CaCDR1和CaCDR2在介导白念珠菌耐药中的作用奠定基础。方法:利用Pfam网络预测程序和Blastn、Blastx程序设计引物,采用PCR法获得白念珠菌SC5314基因组上486 bp长度的CDR1和CDR2目的基因,并将其克隆入pET-28a(+)质粒,构建重组表达质粒后,转化入大肠埃希菌BL21宿主菌内,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达6×His融合蛋白;经镍柱纯化蛋白后,免疫新西兰兔,制备兔抗多克隆抗体。用ELISA及蛋白印迹法检测该抗体的效价和特异性。结果:ELISA法检测所制备抗体的效价最终定为1∶12 800,工作浓度定为1∶800;蛋白印迹法检测结果显示,抗体能与CaCDR1及CaCDR2蛋白特异性结合。结论:成功获得具有较高效价和良好特异性的CaCDR1、CaCDR2多克隆抗体,可用于白念珠菌CaCDR1、CaCDR2蛋白水平的鉴定。

摘要：目的分析感染广州管圆线虫后福寿螺G型溶菌酶基因的组织表达特征。方法根据福寿螺G型溶菌酶基因序列,设计特异性引物, PCR扩增后进行测序,利用在线软件ExPASy、 signalP 4.1、 TMHMM2.0、Smart、 MEGA7对其序列的基本生物学信息进行分析,并构建系统进化树。取含有广州管圆线虫Ⅰ期幼虫的大鼠粪便喂食福寿螺,感染后24 h统一饲养,分别于感染后1、 10、 20、 30 d各取3~5只福寿螺采集肝胰腺、肾脏、肠道、头足和鳃组织,未感染的福寿螺为阴性对照组。提取各个感染时期福寿螺各组织总RNA,逆转录为cDNA,荧光定量PCR分析福寿螺G型溶菌酶mRNA的组织表达特征,设定对照组福寿螺各组织的G型溶菌酶m RNA的相对表达量为1.0±0.0。结果PCR扩增福寿螺G型溶菌酶基因片段,长度约为800 bp。测序结果显示,为一段828 bp的完整开放读码框,编码275个氨基酸。生物信息学分析结果显示, G型溶菌酶基因编码产物为稳定的疏水性蛋白,在1~19位存在1个信号肽,主要在细胞外包括细胞壁发挥作用,在18~85位氨基酸处存在1个SH3b结构域。系统进化树分析显示,福寿螺G型溶菌酶与尖膀胱螺的亲缘关系最近,序列一致性达79%;其次与海湾扇贝等其他软体动物较近,并聚类在一个大的分支上。荧光定量PCR结果显示,对照组雌性成年螺肝胰腺组织中, G型溶菌酶mRNA的拷贝数为2 238±158,高于雄性的685±27 (P <0.05)。福寿螺感染广州管圆线虫后,肝胰腺、肾脏、肠道、鳃和头足部的G型溶菌酶基因相对表达量,与对照组相比均有不同程度的下降(P <0.01)。感染后1、 10、 20、 30 d鳃中G型溶菌酶mRNA的相对表达量分别为0.002±0.002、 0.012±0.050、 0.001±0.000、 0.004±0.003,均低于对照组(P <0.01);肾脏组织中10 d和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);肝胰腺组织中1、 10和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);感染后1、 10、 20、 30 d肠道组织中的相对表达量分别为0.280±0.040、 0.070±0.030、 0.039±0.002、 0.120±0.050,均低于对照组(P <0.05),头足部组织中的相对表达量分别为0.280±0.150、 0.150±0.008、 0.031±0.011、 0.120±0.030,均低于对照组(P <0.05)。结论福寿螺感染广州管圆线虫后, G型溶菌酶基因在鳃、肠、头足组织中各个感染时期表达均下调,肝胰腺组织中感染后1、 10、 20 d表达下调,肾脏组织中感染后10 d、 20 d表达下调。

摘要：2001年，随着上海城市用电量剧增，上海市电力公司新建了一大批城市变电站，这些变电站大部分建在市中心，为全户内变电站。它们被密集的居民住宅区所包围，或与高级金融贸易商务区毗邻。

摘要：阐述常用的带压储罐(真空罐群、子母罐或球罐)及常压储罐(单容罐、全容罐)特点。从占地面积、投资、配套设施、施工期及难易程度、运行费用及操作难易程度等角度,对各类常见LNG储罐进行比较分析,给出选型建议。

摘要：2019年国家电网公司印发了《关于进一步严格控制电网投资的通知》,规定公司"不得以投资、租赁或合同能源管理等方式开展电网侧电化学储能设施建设,不再安排抽水蓄能新开工项目"。这一文件的发布对快速布局的电网侧储能造成了极大影响;同时电改政策意外造成峰谷价差缩小的情况也在动摇负荷侧储能商业模式根基;而电源侧虽然火储市场和新能源+储能市场表现活跃但仍然面临风险和发展制约。目前储能市场似乎在各个方面都遇到了发展阻力,使得储能市场发展方向变得扑朔迷离。通过对近年来电源侧、电网侧、负荷侧储能市场的发展情况及相关政策进行梳理分析,从而提出了储能市场的未来发展方向。

摘要：目的从我国细粒棘球绦虫分离株(新疆源和甘肃源)中克隆AgB1和AgB2两个亚单位基因,并试用不同的表达载体对两个AgB亚单位基因的表达情况进行比较观察。方法设计特异性引物,扩增AgB1和AgB2亚单位抗原基因,分别用pET28a(+)、pET32a(+)和pGEX4T-13种表达载体构建重组质粒,对AgB亚单位基因在不同载体中的表达情况进行比较。结果从我国细粒棘球绦虫分离株中克隆的AgB1和AgB2抗原基因与GenBank中的序列比对,AgB1与德国人源、巴西羊源、意大利牛源均有一定的核苷酸和氨基酸差异;AgB2与乌拉圭羊源序列完全一致。在3种载体中表达重组蛋白的结果显示,不同载体和表达系统对重组表达蛋白的生物活性和可溶性有较大的影响。结论成功地克隆了细粒棘球蚴AgB亚单位基因,AgB1和AgB2基因在3种不同表达载体中的表达情况及对融合标签蛋白的血清基础反应性的比较分析表明,两个重组抗原在pET32a载体中的表达优于pET28a和pGEX4T-1载体。

摘要：目的:为了在软土暗挖技术领域推广UBIT(束合管幕)施工方法,特针对应用该施工方法的大断面地铁车站建造方案进行研究。方法:以上海轨道交通23号线的某车站为工程背景,结合周边环境、道路交通、控制管线明确工作井设置、暗挖段长度及顶覆土厚度等总体方案;确定包括宽度限界、高度限界、管线排布的使用功能限界,提出采用A型车的地铁车站类矩形断面建筑设计标准;考虑预应力张拉施工阶段、土体已开挖使用阶段的两阶段受力平衡,拟合结构断面;结合束合管节节间接缝的受力特征,建立刚性板-耦合单元非线性本构模型;通过有限元手段研究断面内力变形,并进行预应力配束计算研究。结果及结论:实施中应尽量减少顶部覆土、缩短一次性管节顶进长度,以有利于控制钢管节尺寸、施工误差;大断面束合管幕法地铁车站建造应优选类矩形断面,以充分利用拱形受力特点。但值得注意的是,类矩形断面的预应力张拉,会产生显著的次生内力及变形,且其影响与曲率成正相关。针对城市轨道交通工程常见的3~5 m覆土,在内力、变形双控标准下,建立了类矩形断面预应力钢绞线的配束标准。

摘要：目的为鉴定慢病毒介导的转基因小鼠中外源基因的整合位点信息，应用接头PCR克隆整合位点旁侧序列。方法小鼠基因组总DNA酶解后与设计的接头片段连接，根据慢病毒的LTR序列设计巢式PCR引物，克隆转基因小鼠整合位点旁侧序列。结果成功克隆到转基因小鼠整合位点的旁侧序列，经过测序定位于小鼠染色体上。结论作为反向PCR的改进，本方法可用于转基因小鼠整合位点旁侧序列的克隆，为分析整合位点与外源基因表达之间的关系等提供了科学依据。