摘要：目的:研究七氟烷(Sev)产生肌松作用的主要部位。方法:将64只小鼠按基础抓力、体重,用分层随机区组设计均分为鞘内(it)注射组和侧脑室(icv)注射组,每组再各分为人工脑脊液(aCSF)组(0.25μL·g-1)、Sev1组(0.25mg·g-1)、Sev2组(0.31mg·g-1)、Sev3组(0.39mg·g-1),每小组8只,给予相应药物,注射时间为10s,留针时间为15s,考察各组小鼠给药前和给药后5、10、15、20、25、30min的抓力变化。结果:与aCSF组比较,it和icv注射Sev各组小鼠抓力均减小,且注射Sev浓度越高小鼠抓力越小,其中Sev2组和Sev3组具有显著性差异(P<0.05或P<0.01);与icv组比较,it组中的Sev2组、Sev3组小鼠抓力均显著减小(P<0.01)。结论:it和icv注射Sev后均可产生剂量依赖性的肌松作用,但相同剂量下it注射后作用更强,提示脊髓可能是Sev产生肌松作用的主要部位。

摘要：背景:亚低温(28～35℃)正成为一种治疗急性缺血性卒中较有前景的方法,低温可有效地减轻脑水肿是其神经保护作用之一。目的:观察亚低温对大鼠脑缺血再灌注后脑含水量和水通道蛋白4(AQP4)表达的影响,探讨亚低温脑保护的作用机制。设计:随机对照实验。单位:徐州医学院神经生物实验室。材料:选择健康雄性SD大鼠110只,体质量250～300g,由徐州医学院实验动物中心提供[***(苏)2002-0079]。应用SPSS11.0统计软件将大鼠随机分3组:①假手术组(n=10);②常温组(n=50);③亚低温组(33℃,n=50)。常温组及亚低温组又分为缺血后再灌注6h,1d,2d,3d,7d各亚组,每亚组各10只大鼠。每组中5只用于脑含水量测定,5只用于苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色。方法:参考Pulsinelli方法对常温组及亚低温组大鼠制备四动脉结扎全脑缺血模型,缺血时间为15min。假手术组大鼠仅电凝双侧椎动脉及分离颈总动脉,不作结扎,手术后24h断头取脑。对常温组及亚低温组大鼠脑组织切片,HE染色及免疫组化染色,分别于再灌注后6h,1d,2d,3d,7d观察脑组织病理学和AQP4表达水平的动态变化;干湿重法测定各组大鼠各时间点脑含水量。主要观察指标:①常温组及亚低温组大鼠脑组织病理学变化。②所有大鼠各时间点脑含水量及AQP4表达水平。结果:①常温组大鼠在缺血再灌注后6h可见血管周围间隙增宽、细胞外间隙扩大、脑组织变疏松等脑组织水肿表现,以缺血再灌注后2d最明显;亚低温组大鼠各时间点与相应的常温组比较,脑组织水肿表现相对减轻。②常温组及亚低温组大鼠缺血再灌注后6h内即出现脑含水量增高,2d达高峰,7d时脑含水量明显减少,但仍高于假手术组。亚低温组脑含水量均较相应时间点的常温组少(6h,7d组P<0.01,余各组P<0.05)。③常温组及亚低温组大鼠AQP4表达水平在再灌注后6h增高,2d达最高水平,7d时明显降低,但仍较假手术组高。亚低温组AQP4表达水平均较相应时间点的常温组降低(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注后AQP4表达水平的变化趋势与脑含水量变化趋势在时间上一致,表明AQP4表达上调可能是缺血性脑水肿形成的分子机制之一。亚低温可减轻缺血性脑水肿,而通过抑制AQP4表达可能是亚低温减轻缺血性脑水肿的作用机制之一。

摘要：目的:构建针对肿瘤增殖基因Ki67的小干扰RNA(Ki67-siRNA)腺病毒表达载体,体外研究其对人结肠癌细胞株SW620细胞生长影响,为结肠癌的基因治疗提供参考。方法:设计可形成小发夹结构的Ki67-siRNA对应模板DNA序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pCA13,构建Ki67-siRNA表达质粒pCA13-Ki67。鉴定正确后,将pCA13-Ki67与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染至293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒Ad-Ki67。大量扩增Ad-Ki67,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。Ad-Ki67感染人结肠癌细胞,结晶紫染色法检测细胞病理作用,MTT法检测细胞存活,Western印迹法检测Ki67表达。结果:酶切分析、测序鉴定表明pCA13-Ki67构建成功,PCR分析表明Ad-Ki67含有Ki67-siRNA序列。Ad-Ki67可显著抑制Ki67蛋白表达及结肠癌细胞生长。结论:含有Ki67-siRNA的重组腺病毒构建成功,其能抑制人结肠癌细胞Ki67基因表达和生长。

摘要：背景:全膝置换术(totalkneearthroplasty,TKA)中熟练掌握胫骨假体置放的正确位置,是术后患者膝关节功能恢复的重要影响因素。目的:探讨人工全膝关节置换术中胫骨假体放置的点、线、面定位及其相互关系,以提高手术后患肢膝关节功能和关节稳定性。设计:前后对照研究。单位:一所大学医院骨科的病房。对象:1999-05/2004-09徐州医学院附属医院骨科收治的严重骨关节病及类风湿性关节炎需行膝关节置换患者12例,男4例,女8例;双侧膝置换1例,单侧置换11例;左膝关节4个,右膝关节9个。方法:按标准手术方法手术,着重胫骨假体的放置兼顾点、线、面定位及其相互关系。于手术前后进行膝关节侧方稳定性评估和HSS膝关节功能系统评价。主要观察指标:①患者手术前后膝关节侧方稳定性。②膝关节功能系统评分包括疼痛、功能、活动范围、肌力、屈曲畸形和稳定性。③X射线()观察结果。结果:12例按照Knee-Society-Scores标准KSS系统评价,术前轻度侧方不稳3例,中度不稳7例,严重不稳2例;术后仅轻度侧方不稳1例,中重度不稳者未见。按照HSS系统评价术前评分平均为41分,术后随访时评分平均为89分,术后优良率达91.7%(11/12)。结论:TKA注意胫骨假体的点、线、面定位及其相互关系,可以增强膝关节稳定性,明显改善患者疼痛、关节功能及关节?

摘要：目的:通过观察大鼠实验性出血性脑水肿的MRI动态变化,分析亚低温对脑水肿的干预效果。方法:实验于2004-03/2005-04在徐州医学院神经生物学教研室和徐州医学院附属医院核磁共振室完成。选用22只健康SD雄性大鼠,按完全随机设计的方法分为3组,亚低温组、对照组、假手术组分别为9,10和3只。亚低温组与对照组组大鼠苍白球注射胶原酶造成脑出血模型,假手术组不注射药物。亚低温组大鼠随即放至装有冰袋的纸箱中降温,使肛温维持在(32±1)℃;对照组及假手术组使体温维持在(37±1)℃。通过观察MRI[T1,T2,FLAIR(液体衰减反转恢复序列)]的相关指标计算各组大鼠的血肿吸收率[血肿吸收率=(出血后1d的血肿体积-出血后7d的血肿体积)/出血后1d的血肿体积×100%]、水肿吸收率(计算方法同血肿吸收率)、信号强度比(反应脑水肿的相对含水量,T2WI,FLAIR序列信号强度比越高,含水量越多)及信号强度比相对变化率(计算方法同血肿吸收率)。结果:因死亡及MRI显示血肿过小等原因,最后进入结果分析亚低温组、对照组、假手术组分别为6,6和3只。①亚低温组大鼠的血肿吸收率显著高于对照组[(68.27±6.14)%,(61.19±4.19)%(P0.05)。各个时间点亚低温组大鼠T2WI,FLAIR序列的信号强度比均明显低于对照组(P<0.01)。亚低温组大鼠T2WI,FLAIR序列的信号强度比相对变化率显著高于对照组(t=5.038,4.629,P<0.01)。结论:亚低温可促进大鼠脑出血模型脑内血肿及水肿的吸收,可减低T2WI,FLAIR序列水肿区的信号强度,提示亚低温可减少水肿区的含水量。

摘要：背景:心血管疾病是影响慢性肾脏病患者预后的重要因素,维持性血液透析患者中80%存在不同程度及类型的心血管并发症。目的:调查维持性血液透析患者心血管疾病的发病情况和病变特点,并探讨其危险因素。设计、时间及地点:病例调查分析,于2007-09在徐州医学院附属医院血液净化中心完成。对象:选择接受维持性血液透析治疗的52例尿毒症患者,男37例,女15例,年龄(55.1±16.5)岁,透析年龄平均18.5个月。方法:对52例维持性血液透析患者进行流行病学调查,收集患者临床资料和生化指标,心脏超声检查测量心脏腔径及心功能参数,分析心脏结构和功能异常的患病率、病变特点及其影响因素。主要观察指标:左房增大、瓣膜返流、瓣膜钙化、肺动脉高压、心包积液、左室肥厚、左室舒张功能减低及左室收缩功能减。结果:52例维持性血液透析患者中,瓣膜返流的患病率最高为73%,左室舒张功能减低次之为71.2%,左室肥厚为67.3%,左房增大53.8%。危险因素进行单因素计量参数及多因素Logistic回归分析发现,血脂异常包括总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇增高、高密度脂蛋白胆固醇降低,血尿素氮、血尿酸、贫血(红细胞比容下降)、高血磷、低白蛋白、收缩压、透析龄、超滤量是维持性血液透析患者心血管疾病的危险因素(P<0.05)。结论:维持性血液透析患者心血管疾病的患病率较高,主要表现为瓣膜返流、左室舒张功能减低、左室肥厚、左房增大。脂代谢紊乱、收缩压高、贫血、高血磷、低白蛋白可能是维持性血液透析患者并发心脏病变的主要危险因素。

摘要：背景:急性心肌缺血时c-JunN末端蛋白激酶(c-JunN-terminalproteinkinase,JNK)被激活,并使得缺血损伤加重。慢性冬眠心肌组织中JNK的亚型———JNK1/2是否被激活及其在慢性冬眠心肌发生发展机制中的作用又是什么呢?目的:明确慢性冬眠心肌组织中JNK1/2的蛋白表达及其磷酸化(p-JNK1/2)的变化。设计:随机对照的实验研究。单位:徐州医学院附属医院心血管病研究所。材料和方法:在徐州医学院附属医院导管室进行动物模型的制备、在徐州医学院生化教研室测定JNK1/2的蛋白表达及其磷酸化(p-JNK1/2)的变化。将14只小型中国家猪随机分为实验组(n=8)与对照组(n=6)。实验组以右冠状动脉为靶血管,经右股动脉送入自制的缩窄器,制备成慢性冬眠心肌及心肌梗死的模型。获取对照组心肌组织、实验组中的正常心肌组织及慢性冬眠心肌组织的样本进行光镜、电镜检查并采用免疫印迹(Westernblotting)分析3组心肌组织的JNK1/2的蛋白表达及其磷酸化的变化。主要观察指标:慢性冬眠心肌组织中JNK1/2是否被活化。结果:实验组慢性冬眠心肌组织p-JNK1/2比实验组正常心肌组织、对照组心肌组织高。对照组、实验组正常心肌组织、实验组慢性冬眠心肌组织p-JNK1/2的免疫活性分别为1,1.42±0.52,2.6±0.59。

摘要：背景:造血干细胞移植成功的主要障碍是移植后的各种并发症,早期并发症主要与预处理有关。找出合理的剂量和新的高效低毒的预处理方案是提高造血干细胞移植成功率的关键。目的:了解以烷化剂为主的联合化疗作预处理,进行造血干细胞移植治疗恶性血液病的相关毒性和移植效果。设计:观察对比实验。地点:徐州医学院附属医院血液科。对象:选择1997-07/2006-02在徐州医学院附属医院住院的45例白血病及淋巴瘤患者,男31例,女14例,年龄7～52岁,中位年龄31岁。移植时病程5～17个月,平均8个月。方法:对45例白血病及淋巴瘤缓解期患者进行骨髓及外周血干细胞移植,预处理方案为以烷化剂为主的联合化疗,髓外毒性分级采用Bearman等制订的标准,预处理相关毒性分5个级别,即由无毒性(0级)至致死性毒性(Ⅳ级)。统计分析完全缓解率、完全缓解时间、复发率和无病生存期。主要观察指标:各脏器预处理相关毒性发生情况。结果:①5例无任何毒性发生,最大毒性为Ⅲ级者占13%(6/45)。各脏器预处理相关毒性大多数为Ⅰ～Ⅱ级,严重的预处理相关毒性Ⅲ级不多见。在Ⅰ～Ⅱ级预处理相关毒性中口腔黏膜溃疡和胃肠道毒性发生率较高,分别为73%(33/45)和51%(23/45),经治疗后短期内恢复;心脏毒性发生率低,均为Ⅰ级,多为心动过速和ST-T改变;肝脏预处理相关毒性,除2例肝静脉闭塞病外,多表现为转氨酶增高,4例出血性膀胱炎,其中1例为迟发性出血性膀胱炎。肾、肺和中枢神经系统预处理相关毒性少见。②移植后43例患者造血功能获得重建,植入失败死亡2例(4%)。中位随访时间37(8～102)个月,复发10例及移植相关并发症死亡5例,28例仍长期无病生存(62.2%)。100d内移植相关死亡原因主要为急性移植物抗宿主病,巨细胞病毒性间质性肺炎,侵袭性感染,多脏器功能衰竭和早期复发。结论:烷化剂为主的预处理方案进行造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤相关毒性轻,患者耐受好。

摘要：背景:甲氧基聚乙二醇可在淋巴细胞表面形成空间位阻而遮蔽T细胞表面抗原;OX40及其配体OX40L是一对重要的协同刺激信号分子,阻断该信号通路可使T细胞处于无反应性的失能状态,诱导免疫耐受。目的:为获得更为理想的免疫耐受状态,检测甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯(methoxy-polyethyleneglycol-succinimidyl-propionicacidester,mPEG-SPA)化学修饰联合抗OX40L单抗对移植物T淋巴细胞增殖、表型及分泌细胞因子的影响。设计、时间及地点:对比观察移植物免疫耐受体外实验,于2006-12/2007-06在徐州医学院附属医院血液病研究室完成。材料:清洁级近交系C57BL/6(H-2b)雄性和BALB/c(H-2d)雌性成年小鼠各12只,制备的脾淋巴细胞分别作为反应细胞和刺激细胞。mPEG-SPA为北京凯正公司产品,大鼠抗小鼠OX40L单抗为eBioscience公司产品。方法:将反应细胞密度调整为4×109L-1,分别加入3,6,12,15,18g/LmPEG-SPA修饰1h,以加入相同体积的磷酸盐缓冲液作空白对照;另向反应细胞中加入15g/LmPEG-SPA分别修饰1h,24h,48h,96h,120h,流式细胞仪检测脾淋巴细胞表面CD3分子的表达。单向混合淋巴细胞培养分4组:细胞对照组,单纯加入刺激细胞+反应细胞;抗OX40L单抗组,向两种细胞中加入10mg/L抗OX40L单抗;mPEG-SPA组,向两种细胞中加入15g/LmPEG-SPA;联合组,向两种细胞中加入抗OX40L单抗和mPEG-SPA。主要观察指标:CD3分子的表达水平,其反映mPEG-SPA遮蔽脾淋巴细胞的效果。淋巴细胞增殖情况与表型分析。培养上清细胞因子含量。结果:①不同浓度mPEG-SPA修饰后淋巴细胞表面CD3分子的表达均明显低于空白对照,且15,18g/LmPEG-SPA降低幅度尤为明显(P0.05)。与细胞对照组比较,抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组对淋巴细胞的增殖抑制率均明显升高,联合组抑制效果最强(P0.05),联合组明显降低(P<0.05)。抗OX40L单抗组、mPEG-SPA组、联合组γ-干扰素含量均明显低于细胞对照组,且联合组降低幅度更为显著(P<0.05);联合组白细胞介素4含量明显高于细胞对照组(P<0.05)。结论:甲氧基聚乙二醇衍生物可明显遮蔽淋巴细胞表面抗原,且对抗原的遮蔽作用较持久;其与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路,抑制T细胞的增殖活性,使Th0类细胞向Th2类细胞偏离。

摘要：背景:外周血干细胞移植成功的首要条件是干细胞的有效动员和采集,选择高效低毒的动员方案,掌握动员和采集时机与动员效果密切相关。目的:探讨米托蒽醌-大剂量阿糖胞苷方案化疗后,单用粒细胞集落刺激因子或粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子合用对恶性血液病和实体瘤患者自体外周血干细胞的动员效果。设计:观察对比实验。单位:徐州医学院附属医院血液科。对象:选择1998-09/2006-12在徐州医学院附属医院血液科收治的42例恶性血液病和实体瘤患者,诊断符合国际白血病分型及世界卫生组织新分类标准。男25例,女17例,年龄7～54岁,平均29岁,体质量(52±18)kg。其中急性髓细胞白血病12例,急性淋巴细胞白血病6例,慢性粒细胞白血病慢性期1例,非霍奇金淋巴瘤15例,霍奇金淋巴瘤4例,多发性骨髓瘤2例,晚期乳癌2例。患者均经常规化疗达到或接近完全缓解,骨髓细胞学检查无肿瘤细胞浸润。心、肺、肝、肾等主要脏器功能正常。动员前化疗疗程平均8次,所有患者均对治疗项目知情同意。方法:患者均采用米托蒽醌10mg/(m2·d)静脉滴注第2～3d后,阿糖胞苷2g/m2静脉滴注第1～2d,1次/12h。当白细胞计数下降至最低点开始回升时,20例患者使用粒细胞集落刺激因子5～7.5μg/(kg·d),连用3～5d,22例患者早6:00给予粒细胞集落刺激因子5～7.5μg/(kg·d),晚6:00给予粒-巨噬细胞集落刺激因子5～7μg/(kg·d)。白细胞计数>2.5×109 L-1,CD34+细胞≥1%时,用CS3000plus血细胞分离机连续2d采集自体外周血干细胞,检测CD34+细胞含量和T淋巴细胞亚群。①单个核细胞与FITC标记的CD34+、CD3和CD8单抗及与CD4PE标记的CD4单抗4℃混合30min,采用流式细胞仪检测CD34+细胞和T细胞亚群,分析5×105个细胞,得出CD3、CD34+细胞含量及CD4/CD8比值。用甲基纤维素法测定粒-巨噬细胞集落形成单位。②观察术后相关不良反应。③针对不同类型疾病给予相应预处理36～48h后回输自体外周血干细胞,并行单个核细胞计数及台盼蓝染色,解冻后检测粒-巨噬细胞集落形成单位和CD34+细胞。主要观察指标:①动员前后CD34+细胞和T细胞亚群变化。②术后相关不良反应。③自体外周血干细胞回输量(单个核细胞计数、粒-巨噬细胞集落形成单位和CD34+细胞数)。结果:纳入患者42例,均进入结果分析。①动员前后CD34+细胞和T细胞亚群变化:患者应用粒细胞集落刺激因子/粒-巨噬细胞集落刺激因子动员后外周血CD34+细胞明显增加[(0.054±0.032)%,(1.82±0.76)%,P0.05)。②外周血干细胞动员相关不良反应:全部病例出现Ⅱ～Ⅲ度脱发,血小板均有不同程度的下降,为(54.43±26.14)×109 L-1,21例患者出现感染性发热(37.8～41.0℃),经抗生素治疗感染均在短期内得到控制。13例患者在白细胞快速上升时出现骨骼疼痛(腰骶部为主)。③自体外周血干细胞回输量:自体外周血干细胞非程控冷冻-80℃保存2.0～6.5个月,细胞回收率(88.7±7.4)%,台盼蓝拒染率(92.1±5.5)%,回输的单个核细胞(5.21±2.44)×108/kg,CD34+细胞(6.89±3.55)×106/kg,粒-巨噬细胞集落形成单位(2.58±2.33)×105/kg。④循环血量每次10～16L(终点分血量均在3个TBV上)。无严重毒副反应。26例接受自体外周血干细胞移植者造血功能均获得满意重建。结论:米托蒽醌-大剂量阿糖胞苷方案化疗后单用粒细胞集落刺激因子及粒细胞集落刺激因子与粒-巨噬细胞集落刺激因子合用均能安全、有效动员自体外周血干细胞,但以合用更为有效。大容量采集是提高干细胞产率,减少采集次数的重要手段。