摘要：目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组dna,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应条件。结果:通过PCR-核酸试纸条对蛤蚧进行定性分析,正品蛤蚧在PCR-核酸试纸条上均出现2条带,伪品以及阴性对照均出现1条带。结论:PCR-核酸试纸条检测方法可实现短时间内蛤蚧可视化检测,操作方便,结果准确,可以为蛤蚧的dna分子鉴别提供技术保障。

摘要：以93份代表自交系及27套包括杂交种及双亲在内的三联体材料为试材,分别用Qiagen和ABI3730两种dna分析仪,从111对新型玉米SSR引物中筛选出多态性高、稳定性好、适于自动化分型的引物9对,确定1套适合SSR引物评估筛选的方案,可以为今后引物设计至评估入选提供高效的筛选方案提供参考。

摘要：目的建立中药材鹿心dna指纹鉴定方法,研发鹿心dna检测试剂盒。方法以梅花鹿和马鹿mtdna Cytb基因作为靶基因,设计小片段特异性引物,研制鹿心dna提取及PCR检测试剂;应用分子克隆及测序技术,克隆鹿心对照药材;并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察;对市售鹿心样品进行真伪鉴定。结果自主研发的试剂提取鹿心的dna浓度纯度均达到PCR的要求;在退火温度为63℃时引物的特异性最强;克隆测序后的鹿心dna序列与鹿心mtdna Cytb特异指纹区段序列一致;自主研发的试剂重现性、稳定性良好,灵敏度达到0.5%;对市售30个鹿心样品进行检测,伪品率为40%。结论建立的鹿心dna指纹鉴定方法特异、准确、可靠,研制的鹿心dna检测试剂盒操作简便、结果稳定。

摘要：描述采自浙江省苕溪水系■属(Zacco)鱼类一新种——苕溪■(Zacco tiaoxiensis ***.)。经形态比较,该新种与广泛分布于浙江各水系的棘颊■(***)形态较相似,但与之有着较明显的形态差异:侧线鳞41~44(vs.44~47),侧线上鳞8(vs.8~10),侧线下鳞3~4(vs.4~5),围尾柄鳞12~15(vs.14~17),性成熟的雄性个体腹鳍到达(vs.超过)肛门。新种与异域分布的中华■(***)和宽鳍■(***)的形态区别主要在侧线下鳞数目、头长与体长的比例等可比性状以及眼睛上缘颜色等。基于线粒体细胞色素b基因的遗传分析也支持苕溪■为一独立物种。

摘要：基于玉米胚乳中母本和父本dna的2∶1的剂量关系,利用20个InDel标记在荧光毛细管电泳平台上对玉米进行亲子鉴定并得到玉米杂交种三联体的指纹数据。研究利用8个玉米杂交种单株的胚及胚乳dna得到在11个杂和位点上每个基因型的峰面积,并计算得出胚和胚乳各自的等位基因扩增比(左峰面积/右峰面积)。通过比较发现,胚及胚乳之间的等位基因扩增比具有显著差异。在其中4个标记上(IDP054、IDP151、IDP161、IDP238),胚乳dna等位基因扩增比较胚dna低,胚乳的右峰面积较大,说明右峰代表基因型的dna含量较高,判断该位点右峰代表的基因型为母本基因型。依此判断另外7个标记的左峰代表基因型为母本基因型,最终得到玉米杂交种三联体的指纹数据,通过与杂交种双亲的指纹进行比对验证判断结果的正确性。

摘要：根据转基因玉米2A-5的旁侧序列信息,设计并筛选出最佳特异性引物及Taqman探针组合2A-5-5-QF8、2A-5-5-QR8、2A-5-5-QP8,优化了该引物探针组合的反应体系,建立了转基因玉米2A-5转化体特异性PCR检测方法。将特异性引物及Taqman探针组合用于qRT-PCR和ddPCR技术,研究了转基因玉米2A-5转化体的定量检测方法,发现PCR定量检测转基因含量与测定样品转基因含量之间呈高度正相关。研究获得的转基因玉米2A-5转化体特异性PCR检测方法及定量qRT-PCR、ddPCR检测方法具有较高的特异性、准确性和灵敏度,是今后准确、高效检测2A-5及其产品的有效方法之一,同时也为我国转基因生物安全监管提供了良好的技术支撑。

摘要：目的建立中药材蛤蚧聚合酶链反应(PCR)-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法,研发快速基因检测试剂盒。方法筛选提取基因组dna的方法及试剂,根据蛤蚧mtdna cytb基因设计种属特异性引物并标记,筛选最佳反应条件,研发PCR基因检测试剂,采用分子克隆及基因测序技术制备对照药材dna克隆液,利用免疫胶体金试纸条进行结果检测。进而,开发出一体化快速基因检测试剂盒,并对特异性、重现性、灵敏性、稳定性进行评价。结果基因组dna的完整性、浓度、纯度均满足PCR的要求,引物在退火温度63℃时,循环20次时,免疫胶体金试纸条显示:蛤蚧对照药材及正品出现两条红色条带,易混品及空白对照出现一条红的条带。琼脂糖凝胶电泳验证正确。对照药材克隆测序结果于蛤蚧mtdna cytb基因同源性100%。一体化快速基因检测试剂盒的特异性强、重现性好、稳定性好、灵敏度高于琼脂糖凝胶电泳10倍。结论PCR-免疫胶体金试纸条鉴定方法能够特异、准确、快速、可视化地鉴定蛤蚧的真伪,一体化快速检测试剂盒使鉴定方法更加规范化、标准化,更适合实地现场检测、适合普遍推广使用。

摘要：建立了重组酶聚合酶扩增反应(recombinase polymerase amplification,RPA)结合侧流层析试纸条技术(RPA-lateral flow dipstick,RPA-LFD)快速鉴别大西洋鳕鱼制品真伪的方法。对比大西洋鳕鱼和常用来冒充鳕鱼的鱼类线粒体基因组序列,设计针对大西洋鳕鱼的特异性探针和引物,建立针对大西洋鳕鱼的RPA-LFD检测方法。该实验筛选最佳引物和探针并评估其特异性,优化反应温度、时间和现场检测条件,并对20份市售“大西洋鳕鱼”及常见的冒充鳕鱼的鱼类制品进行现场检测,评估检测效果。实验结果表明,RPA-LFD检测方法特异性强,在44℃、14 min条件下的检测效果最好。在现场开展快速检测,效果良好,20份鳕鱼制品检测结果经过基因测序证实和产品真实成分一致。该研究建立的大西洋鳕鱼RPA-LFD检测方法特异性强、反应耗时短、操作简便、结果可视,有良好的现场快速检测应用前景,为大西洋鳕鱼制品现场快速检测提供了新思路,为水产品市场监管提供了技术支持。

摘要：目的建立快速检测阿胶原料皮张源性的方法。方法根据马、驴、驴骡和马骡的核基因肌酸激酶CKM和线粒体基因组dna(mt dna)的16S rRNA基因序列设计特异,并引入18S r dna作为内参质控,建立能检测4种动物源性的5重多色荧光定量PCR检测体系。结果本研究开发的引物和分子信标探针的特异性强,能同时区分同源性相近的驴、马、驴骡和马骡源性;灵敏度高,检测限为0.01 ng·μL-1。通过对某阿胶制品公司收购的驴皮源性检测,检测结果与dna测序一致率达100%。结论本方法在一管PCR反应中能同时检测4种动物源性,更简单、准确和高效,为驴皮、马皮及骡子皮张的源性鉴定探索了新的途径。

摘要：目的:筛选能有效中和炭疽毒素和抵抗炭疽毒素损伤细胞的CMG2-Fc(炭疽毒素受体II-人免疫球蛋白Fc段融合蛋白)突变体。方法:运用FoldX等计算软件分析CMG2与PA晶体学结构,设计能提高CMG2-PA亲和力的突变体分子,并与人IgG1Fc片段构成融合基因,转染CHO-S细胞并通过亲和层析获得CMG2-Fc突变体蛋白,通过亲和力检测和细胞保护实验分析各突变体中和炭疽毒素能力。结果:筛选并表达了8个CMG2-Fc突变体分子,亲和力实验显示其中E117Q突变可明显提高CMG2-Fc与PA的亲和力(KD=1.35×10-11 mol/L),细胞保护实验提示E117Q突变能有效提高CMG2-Fc中和炭疽毒素能力(CMG2-Fc(E117Q)的IC50为15 ng/μL,而wt CMG2-Fc的IC50为50ng/μL)。结论:CMG2-Fc(E117Q)突变体分子可作为拮抗炭疽毒素损伤的炭疽治疗药物分子,进行进一步研究。