摘要：延长基于蛋白质治疗药物的半衰期可以提高药物疗效。然而,基因治疗本质上是长期表达所需的治疗性药物,药物半衰期对基因治疗疗效的影响尚不清楚。在这项腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)基因治疗研究中,通过与免疫球蛋白G1(immunoglobulin G 1,IgG1)可溶性单体Fc区(soluble monomeric IgG1 fragment crystallizable,sFc)或Fc区融合,设计了几种能够延长半衰期的蛋白质。研究表明,延长AAV递送的小分子双功能蛋白和成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)的半衰期显著增加了它们在血液循环中的浓度。此外,AAV递送FGF21延长其半衰期使2型糖尿病动物模型中肝损伤和血糖显著降低,并改善了葡萄糖耐量和胰岛素敏感性。这些结果证明了延长药物半衰期的基因治疗在应对人类疾病中的治疗潜力。

摘要：背景:骨质疏松涉及破骨细胞分化成熟和成骨类细胞凋亡两方面,肿瘤坏死因子α能诱导多种细胞凋亡且效率差异很大,骨保护素能抑制破骨细胞成熟,但对成骨类细胞凋亡的作用未见报道。目的:探讨肿瘤坏死因子α能否诱导成骨类细胞凋亡及骨保护素能否抑制其凋亡。设计:以成骨细胞和MG63细胞作为实验对象、以鼠WEHI164细胞系用于阳性对照的观察对比分析。单位:解放军总医院全军口腔医学研究所、美国匹茨堡医学院退伍军人医疗中心。材料:本实验于2001-01/2003-12在***实验室和口腔研究所实验室完成。选择商品化细胞系,RPMI1640培养液和各种相关蛋白用于实验。方法:用人间充质干细胞在分化培养液中培养21d使之成为成骨细胞,与MG63一起用于凋亡实验。AnnexinV和原位末端标记法检测肿瘤坏死因子α诱导成骨类细胞凋亡。主要观察指标:全部细胞数及凋亡细胞数。结果:和FasL诱导细胞凋亡一样,肿瘤坏死因子α能引起MG63骨肉瘤细胞,间充质干细胞和成骨细胞的凋亡,并表现为明显的浓度依赖和时间依赖。低浓度肿瘤坏死因子α(170～500pmol/L)作用于细胞2～4h就显示了较明显的凋亡,而骨保护素在0.45～1.5nmol/L浓度时,几乎完全抑制了500pmol/L肿瘤坏死因子α诱导的凋亡。成骨细胞分泌骨保护素,而破骨细胞及破骨前体细胞产生肿瘤坏死因子α,它们相互作用降低成骨细胞的凋亡。结论:肿瘤坏死因子α能诱导成骨类细胞凋亡,骨保护素能够抑制肿瘤坏死因子α的凋亡诱导作用,从抑制破骨细胞成熟和成骨细胞凋亡两方面表现骨保护素防治骨质疏松的作用机制。

摘要：目的构建人FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化基因表达产物,制备兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价,为研究FKBP38的功能奠定基础。方法以人FKBP38 cDNA为模板,根据人FKBP38全长cDNA系列,设计PCR引物分别扩增N-末端(1-207aa)及C-末端(209-387aa),将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-6P1中,经BamH I/Sal I双酶切鉴定。GST-FKBP38-N及GST-FKBP38-C融合蛋白在硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下在大肠杆菌BL21中得到表达。利用谷胱甘肽亲和层析纯化融合蛋白,用纯化的GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。使用纯化的抗FKBP38多抗以Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测FKBP38的表达与细胞内的定位。结果成功构建FKBP38 N-末端及C-末端原核表达载体,表达并纯化了GST-FKBP38-N融合蛋白及GST-FKBP38-C融合蛋白,制备并纯化了FKBP38特异性抗体。该抗体用于Western免疫印迹检测FKBP38在不同细胞株中的表达,特异性强、效价高;用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上;用于免疫组织化学检测FKBP38在乳腺组织细胞呈现胞浆阳性。结论 FKBP38特异性抗体制备成功,该抗体可用于FKBP38的免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测,为深入研究FKBP38的功能奠定基础。

摘要：背景:近来药物治疗的进展和卫生保健环境的变化主要表现为对抑郁症门诊治疗趋势的关注.目的:对1987年和1997年美国门诊抑郁症患者的治疗趋势进行比较.设计和依据:服务应用数据分析.数据来自两项具有全国代表性的美国一般人群调查,1987年国家医疗消费调查(N=34 459)和1997年医疗消费组调查(N=32 636).参加者:为治疗抑郁症,于研究调查期间,报告进行过1次或多次门诊随访的患者.主要观察指标:治疗率、精神药物应用、心理治疗、门诊治疗数、卫生保健专业人员的类别和付款来源.结果:抑郁症门诊治疗率从1987年的0.73%增至1997年的2.33%(P＜0.001).患者应用抗抑郁药物治疗的比例从37.3%增至74.5%(P＜0.001),但是心理治疗患者的比例下降(71.1%比60.2%,P=0.006).每例患者抑郁症治疗访视的平均数从每年12.6次下降至8.7次(P=0.05).越来越多的患者由内科医师治疗(68.9%比87.3%,P＜0.001),而治疗费用更常由第三方支付(39.3%到55.2%,P＜0.001).结论:从1987年至1997年,抑郁症接受门诊治疗的比例有明显增高.治疗变化的特点是:更多内科医师参与,更多应用精神药物,第三方付款增加,但门诊访视减少以及较少应用心理治疗.这些变化与耐受性较好抗抑郁剂的应用、保健管理介入的加强以及临床快速及高效诊断方法的出现相符.

摘要：目的探讨蛋白激酶D3(protein kinaseD3,PKD3)是否会影响依托泊甙对激素抵抗性前列腺癌(hormonal refractory prostate cancer,HRPC)的生长抑制。方法在HRPC细胞系DU-145中瞬时转染PKD3的siRNA,Western blot检测细胞中内源性PKD3的表达变化;siRNA转染48h后,分别以0、30、70、100、300μmol/L的依托泊甙处理对照siRNA、siRNA-PKD3-1、siRNA-PKD3-2转染的DU-145细胞24h,并以细胞活力测定观察敲定内源性PKD3的表达有无影响依托泊甙对DU-145的生长抑制;利用PKC单一抑制剂、PKC-PKD双重抑制剂处理DU-145细胞,以观察二者是否增强DU-145对依托泊甙的敏感性。结果 Westernblot证实siRNA-PKD3的转染敲低DU-145细胞内源性PKD3的表达;细胞活力测定表明,在非特异性siRNA(si-CTL)转染的DU-145细胞中,依托泊甙剂量依赖地抑制DU-145细胞的生长,而敲低PKD3的表达不仅可显著抑制DU-145的生长(P<0.01),还可显著增强依托泊甙对DU-145生长的抑制(P<0.01);Go6976(PKC-PKD的双重抑制剂)可明显抑制前列腺癌DU-145细胞生长(P<0.01),而Go6983(单一的PKC抑制剂)则仅对DU-145的生长起微弱抑制作用。结论 PKD3的表达和活性可增强前列腺癌DU-145细胞对依托泊甙的敏感性,提示可作为抗前列腺癌药物设计的潜在靶点之一。

摘要：背景和目的卒中治疗学术产业圆桌会议（Stroke Treatnlem Academic Industry Roundtable，STAIR）旨在通过学术界、产业界和监管机构之间的合作来推动急性卒中治疗发展。为了追求这一目标，根据大血管闭塞性卒中血管内治疗（endovascular therapy，ET）获益的现有最新I级证据，制定出STAIR第9届会议专家共识推荐意见以概述将来ET领域的研究重点。方法推动该领域发展有3个主要方向：（1）建立在大血管闭塞性卒中患者中实施ET的医疗体系；（2）开发ET的辅助治疗手段；（3）探索ET在近期试验内未经过充分研究的患者人群中的临床获益情况。此外，还对诸如最佳试验设计和转归评价指标之类的方法学问题进行讨论。结果应对医疗体系发展策略进行调整以确保符合ET指征的患者能有机会得到治疗，同时能最大限度地缩短再灌注时间。辅助治疗手段包括神经保护、改善微循环／侧支循环以及围手术期管理。为了扩展适合ET的患者人群范围，将来的研究重点应是确定ET在那些超过传统治疗时间窗的患者、基线梗死核心区较大的患者以及其他重要亚组患者中的获益情况。结论大血管闭塞性卒中ET的研究重点是改进治疗体系、研究有效的辅助治疗手段以及探讨能否扩展ET的治疗指征。

摘要：背景和目的本文旨在为颅内脑动脉瘤的放射学评价和血管内治疗的报道标准、术语和书面定义提供共识性推荐意见。这些标准旨在设计临床试验，为患者的合理选择和分层提供统一的定义，并且允许对报道的数据进行分析和汇总分析。方法本文是由技术评价委员会、神经介入外科学会、介入放射学学会、美国神经外科医师协会和神经外科医师大会的脑血管神经外科联合分会以及美国神经病学学会卒中和介入神经病学分会组成的联合写作组起草完成的。对1991年1月-2007年12月美国国立医学图书馆文献数据库（PubMed）进行计算机检索，以确定已发表的涉及脑动脉瘤的评价和血管内治疗的脑血管介入治疗数据，以此作为质量评价的基准。我们设法确定那些可能影响操作成功和并发症风险的相关危险因素。本文针对脑动脉瘤血管内治疗临床试验设计方面的重要因素，提供了各种临床和技术方面的基本原则。本指南还包含了对这类临床试验统一报道标准的建议。这些定义和标准主要用于研究目的；不过，它们对于临床实践也应有所帮助，并且适用于所有出版物。结论脑动脉瘤的评价和治疗常常涉及多个医学专业。为制定破裂和未破裂脑动脉瘤的临床处理指南，美国心脏协会最近发辰的综述已对相关医学文献进行了回顾。尽管努力综合了脑动脉瘤评价和治疗方面的现有认识，但在以研究和报道为目的的术语和定义方面仍存在明显的不一致性。这些可操作的定义是由一个多学科写作组一致选择的，用来使涉及脑动脉瘤的临床试验和观察性研究中的影像学相关报道一致。这些定义应有助于不同组织发表能够直接进行比较的研究结果。

摘要：背景和目的颅内动脉粥样硬化可导致众多患者发生缺血性卒中。过去10年里的技术发展使颅内动脉粥样硬化狭窄的血管内治疗成为可能。因颅内动脉粥样硬化狭窄而接受血管成形术或支架辅助血管成形术的患者数量不断增加。鉴于在对血管成形术或支架辅助血管成形术治疗颅内动脉粥样硬化狭窄或闭塞的临床和放射学评价、技术和转归进行报道时，尚缺乏普遍接受的定义，本文的目的是为其报道标准、术语和书面定义提供共识性推荐意见。报道摘要本文是由技术评价委员会、神经介入外科学会、介入放射学学会、美国神经外科医师协会和神经外科医师大会的脑血管神经外科联合分会以及美国神经病学学会卒中和介入神经病学分会组成的联合写作组起草完成的。对1997年1月—2007年12月美国国立医学图书馆文献数据库（PubMed）进行计算机检索，以确定已发表的涉及狭窄性颅内动脉粥样硬化的介入治疗数据，以此作为质量评价的基准。我们设法确定那些可能影响操作成功和并发症风险的危险因素。本文针对颅内动脉粥样硬化狭窄或闭塞的血管内治疗临床试验设计的重要因素，提出了各种临床和技术方面的基本原则。本指南还包含了对这类临床试验统一报道标准的建议。这些定义和标准主要用于研究目的；不过，它们对于临床实践也应有所帮助，并且适用于所有出版物。结论总之，这些建议的定义代表了为构建有效研究数据集的推荐意见。其目的是促进科学而严谨的研究结果的产生，使类似研究之间和内部进行可靠的比较成为可能。在某些情况下，本指南中的一些定义由写作组的专家团队一致推荐，以使报道和发表一致。这些定义应能让不同研究小组发表能够进行直接比较的研究结果。

摘要：Objective: The objective of the study was to determine whether the Toyota production system process improves Papanicolaou test quality and patient safety. Study design: An 8-month nonconcurrent cohort study that included 464 case and 639 control women who had a Papanicolaou test was performed. Of fice workflow was redesigned using Toyota production system methods by introducing a 1-by-1 continuous flow process. We measured the frequency of Papanicolaou tests without a transformation zone component, follow-up and Bethesda System diagnostic frequency of atypical squamous cells of undetermined significance, and diagnostic error frequency. Results: After the intervention, the percentage of Papanicolaou tests lacking a transformation zone component decreased from 9.9%to 4.7%(P = .001). The percentage of Papanicolaou tests with a diagnosis of atypical squamous cells of undetermined significance decreased from 7.8%to 3.9%(P = .007). The frequency of error per correlating cytologic-histologic specimen pair decreased from 9.52%to 7.84%. Conclusions: The introduction of the Toyota production system process resulted in improved Papanicolaou test quality.